供体选择对肠易激综合征患者粪便微生物群移植结果的作用

研究描述摘要：200 名患者被随机分配到安慰剂组（自己的粪便），接受来自供体 A、供体 B 或供体 C 的 90 g 粪便移植物。粪便移植物通过工作通道施用到远端十二指肠。胃镜。 患者应在基线和试验结束时填写 5 份问卷，测量症状、疲劳、生活质量和饮食摄入量，并在基线以及 FMT 后 3、6 和 12 个月提供粪便样本。 通过使用覆盖 V3-V9 区域的 16S rRNA 基因 PCR DNA 扩增/探针杂交来确定菌群失调和粪便细菌。

详细说明： 患者：本研究应纳入符合罗马 IV 肠易激综合征 (IBS) 标准的 200 名患者。 除 IBS-U 外，所有 IBS 亚型均应包括在内。 捐赠者：研究人员根据之前随机双盲、安慰剂对照研究中使用的标准选择了 3 名捐赠者（A、B 和 C）。 这些标准包括：健康男性或女性，无病史，未使用药物，年龄 20-50 岁，不吸烟，定期锻炼。 他们通过阴道分娩并进行母乳喂养。 他们一生中只接受过几次抗生素治疗。 他们根据欧洲 FMT 捐赠者指南进行筛选。 在他们被接受为捐赠者之前，使用 GA-map 菌群失调测试对粪便样本中的细菌谱和菌群失调进行了分析，菌群失调指数 (DI)= 1，表明菌群正常。 试验期间每三个月对他们的粪便进行一次检测，以排除传染病。 捐赠者A是一名41岁的男性，捐赠者B是一名31岁的女性，捐赠者C是一名35岁的男性。

方案：患者按 1:1:1:1 随机分配到安慰剂组（接受自己的粪便），分别接受来自供体 A、供体 B 或供体 C 的 90 g 粪便移植。粪便移植通过胃镜的工作通道。 患者应在基线以及 FMT 后 3、6 和 12 个月填写 5 份问卷并提供粪便样本。 粪便收集、准备和管理：应收集捐赠者和患者的粪便并储存在 - 80°C 下。 冷冻供体粪便应在4℃冰箱中解冻，每30g溶解于30mL 4℃冷0.9%无菌盐水中。 禁食过夜后，通过胃十二指肠镜的工作通道将溶解的粪便施用给患者，该工作通道位于十二指肠降部，始终远离 Vater 乳头。 问卷调查

1. IBS 症状严重程度量表 (IBS-SSS)。
2. 伯明翰症状量表。
3. 疲劳评估量表（FAS）。
4. IBS-生活质量 (IBSQoL) 问卷。
5. 半定量食物频率问卷 (FFQ)
6. 布里斯托大便量表

细菌分析：使用覆盖 V3-V9 区域的 16S rRNA 基因 PCR DNA 扩增/探针杂交技术进行粪便细菌分析。 DNA 提取是使用磁珠完成的。 DI 基于 54 个 DNA 探针，针对 300 多种细菌菌株，基于七个可变区 (V3-V9) 的 16S rRNA 序列。 49 种细菌探针是物种特异性的，19 种检测属水平的细菌，9 种探针检测更高分类水平的细菌。 探针标记是通过单核苷酸延伸和与磁珠偶联的互补探针杂交，并使用 BioCode 1000A 128-Plex 分析仪（Applied BioCode，Santa Fe Springs，CA，USA）进行信号检测。 DI 高于 2 显示微生物群特征与正常生物参考集合的微生物群特征不同（DI 1-2：非菌群失调，DI：中度菌群失调，DI 4-5：严重菌群失调）。