Rola doboru dawcy na wynik przeszczepienia mikrobioty kałowej u pacjentów z zespołem jelita drażliwego

Krótkie podsumowanie badania: Dwustu pacjentów przydzielono losowo w proporcji 1:1:1:1 do grupy otrzymującej placebo (własny kał), otrzymując 90 g przeszczepu kału od dawcy A, dawcy B lub dawcy C. Przeszczep kału podaje się do dystalnej części dwunastnicy kanałem roboczym gastroskop. Pacjenci wypełniają 5 kwestionariuszy mierzących objawy, zmęczenie, jakość życia i dietę na początku i na końcu badania oraz dostarczają próbkę kału na początku badania oraz po 3, 6 i 12 miesiącach po FMT. Dysbiozę i bakterie w kale określa się za pomocą amplifikacji DNA/hybrydyzacji sondy 16S rRNA genu PCR obejmującej regiony V3-V9.

Szczegółowy opis: Pacjenci: Do badania zostanie włączonych dwustu pacjentów spełniających IV kryteria rzymskie dotyczące zespołu jelita drażliwego (IBS). Należy uwzględnić wszystkie podtypy IBS z wyjątkiem IBS-U. Dawcy: Badacze wybrali 3 dawców (A, B i C) zgodnie z kryteriami zastosowanymi w ich poprzednim randomizowanym badaniu z podwójnie ślepą próbą i kontrolą placebo. Kryteria te obejmowały: bycie zdrowym mężczyzną lub kobietą, bez historii chorób i niestosowania leków, wiek 20-50 lat, bycie osobą niepalącą i regularną aktywność fizyczną. Urodziły się drogą pochwową i były karmione piersią. Tylko kilka razy w życiu byli leczeni antybiotykami. Są one badane zgodnie z europejskimi wytycznymi dla dawców FMT. Przed przyjęciem ich na dawców zbadano profil bakteryjny i dysbiozę w próbce kału za pomocą testu na dysbiozę GA-map, ze wskaźnikiem dysbiozy (DI) = 1, wskazującym na normobiozyzę. Podczas badania co trzy miesiące ich kał będzie badany w celu wykluczenia choroby zakaźnej. Dawca A to mężczyzna w wieku 41 lat, dawca B to kobieta w wieku 31 lat, a dawca C to mężczyzna w wieku 35 lat.

Protokół: Pacjenci są losowo przydzielani w stosunku 1:1:1:1 do grupy placebo (w celu otrzymania własnego kału) w celu otrzymania 90 g przeszczepu kału od dawcy A, od dawcy B lub dawcy C. Przeszczep kału podaje się do dystalnej części dwunastnicy przez kanał roboczy gastroskopu. Pacjenci powinni wypełnić 5 kwestionariuszy i dostarczyć próbki kału na początku badania oraz po 3, 6 i 12 miesiącach po FMT. Pobieranie, przygotowanie i podawanie kału: Kał zarówno dawców, jak i pacjentów należy zbierać i przechowywać w temperaturze - 80°C. Zamrożone odchody dawców rozmraża się w lodówce w temperaturze 4°C, a każdą 30 g porcję rozpuszcza się w 30 ml sterylnej soli fizjologicznej 0,9% zimnej o temperaturze 4°C. Rozpuszczony stolec podaje się pacjentom po całonocnym poście przez kanał roboczy gastroduodenoskopu w części zstępnej dwunastnicy, zawsze dystalnie od brodawki Vatera. Kwestionariusze

1. Skala ciężkości objawów IBS (IBS-SSS).
2. Skala objawów z Birmingham.
3. Skala Oceny Zmęczenia (FAS).
4. Kwestionariusz IBS – jakość życia (IBSQoL).
5. Półilościowy kwestionariusz częstotliwości jedzenia (FFQ)
6. Skala kształtu stołka Bristol

Analiza bakteryjna: Analizę bakteryjną w kale przeprowadza się przy użyciu techniki amplifikacji/hybrydyzacji DNA metodą PCR 16S rRNA, obejmującej regiony V3-V9. Ekstrakcja DNA odbywa się za pomocą kulek magnetycznych. DI opiera się na 54 sondach DNA ukierunkowanych na ponad 300 szczepów bakteryjnych w oparciu o ich sekwencję 16S rRNA w siedmiu regionach zmiennych (V3-V9). Czterdzieści dziewięć sond bakteryjnych jest specyficznych gatunkowo, 19 wykrywa bakterie na poziomie rodzaju, a 9 sond wykrywa bakterie na wyższych poziomach taksonomicznych. Znakowanie sond odbywa się poprzez wydłużanie pojedynczego nukleotydu i hybrydyzację z sondami komplementarnymi sprzężonymi z kulkami magnetycznymi oraz wykrywanie sygnału przy użyciu analizatora BioCode 1000A 128-Plex Analyzer (Applied BioCode, Santa Fe Springs, Kalifornia, USA). DI powyżej 2 pokazuje profil mikrobioty różniący się od profilu normobiotycznego zbioru referencyjnego (DI 1-2: brak dysbiozy, DI: umiarkowana, DI 4-5: ciężka dysbioza).