Donatorurvalets roll på resultatet av transplantation av fekal mikrobiota hos patienter med Irritabel tarm

Studiebeskrivning Kort sammanfattning: Tvåhundra patienter randomiseras 1:1:1:1 till placebo (egen avföring), som får 90 g fekal transplantation från donator A, donator B eller donator C. Fekaltransplantationen administreras till distala duodenum via arbetskanalen av ett gastroskop. Patienterna ska fylla i 5 frågeformulär som mäter symtom, trötthet, livskvalitet och dietintag vid utgångspunkten och vid slutpunkten av prövningen och tillhandahålla ett avföringsprov vid utgångsläget och 3, 6 och 12 månader efter FMT. Dysbios och fekal bakteriell bestäms genom att använda 16S rRNA-genen PCR DNA-amplifiering/probhybridisering som täcker regionerna V3-V9.

Detaljerad beskrivning: Patienter: Tvåhundra patienter som uppfyller Rom IV-kriterierna för irritabel tarmsyndrom (IBS) ska inkluderas i studien. Alla IBS-subtyper ska inkluderas med undantag för IBS-U. Donatorer: Utredarna har valt ut 3 donatorer (A, B och C) enligt de kriterier som användes i deras tidigare randomiserade dubbelblinda, placebokontrollerade studie. Dessa kriterier inkluderade: att vara en frisk man eller kvinna utan sjukdomshistoria och ingen användning av mediciner, i åldern 20-50 år, vara icke-rökare och träna regelbundet. De bars av vaginal förlossning och ammades. De behandlades endast ett fåtal gånger med antibiotika under sitt liv. De är screenade enligt de europeiska riktlinjerna för donatorer för FMT. Innan de accepteras som donatorer analyserades bakterieprofilen och dysbiosen i ett fekalt prov med GA-map dysbiostestet, med ett dysbiosindex (DI)=1, vilket indikerar normobiosysis. Deras avföring ska testas var tredje månad under försöket för att utesluta smittsam sjukdom. Donator A är en man på 41 år, donator B är en kvinna på 31 år och donator C är en man på 35 år.

Protokoll: Patienterna randomiseras 1:1:1:1 till placebo (för att få sin egen avföring), för att få 90 g fekal transplantation från donator A, från donator B eller donator C. Fekal transplantation administreras till den distala duodenum via arbetskanal för ett gastroskop. Patienterna ska fylla i 5 frågeformulär och leverera fekala prover vid baslinjen och 3, 6 och 12 månader efter FMT. Uppsamling, beredning och administrering av avföring: Avföring från både donatorer och patienter ska samlas upp och förvaras vid -80ºC. Fryst donatoravföring ska tinas i kylskåpet vid 4ºC och varje 30 g portion löses i 30 ml 4ºC kall 0,9 % steril koksaltlösning. Den upplösta avföringen administreras till patienterna, efter fasta över natten, genom arbetskanalen i ett gastroduodenoskop i pars descendens av tolvfingertarmen, alltid distalt från Vaters papill. Frågeformulär

1. IBS Symptom Severity Scale (IBS-SSS).
2. Birmingham Symptom Scale.
3. Fatigue Assessment Scale (FAS).
4. Frågeformulär för IBS-livskvalitet (IBSQoL).
5. Semikvantitativt frågeformulär för matfrekvens (FFQ)
6. Bristol Pall Form Skala

Bakterieanalys: Fekal bakterieanalys utförs med användning av en 16S rRNA-gen PCR DNA-amplifiering/sondhybridiseringsteknik som täcker regionerna V3-V9. DNA-extraktion görs med hjälp av magnetiska pärlor. DI är baserad på 54 DNA-sonder riktade mot mer än 300 bakteriestammar baserat på deras 16S rRNA-sekvens i sju variabla regioner (V3-V9). Fyrtionio bakteriesönder är artspecifika, 19 detekterar bakterier på släktnivå och 9 prober upptäcker bakterier på högre taxonomiska nivåer. Sondmärkning är genom enkel nukleotidförlängning och hybridisering till komplementära prober kopplade till magnetiska pärlor, och signaldetektering med hjälp av BioCode 1000A 128-Plex Analyzer (Applied BioCode, Santa Fe Springs, CA, USA). En DI över 2 visar en mikrobiotaprofil som skiljer sig från den för den normobiotiska referenssamlingen (DI 1-2: icke-dysbios, DI: måttlig, DI 4-5: svår dysbios).