Role výběru dárce na výsledku transplantace fekální mikrobioty u pacientů se syndromem dráždivého tračníku

Popis studie Stručné shrnutí: Dvě stě pacientů bylo randomizováno 1:1:1:1 do placeba (vlastní stolice), kteří obdrželi 90 g fekálního transplantátu od dárce A, dárce B nebo dárce C. Fekální transplantace je podávána do distálního duodena pracovním kanálem gastroskop. Pacienti vyplní 5 dotazníků měřících symptomy, únavu, kvalitu života a příjem stravy na začátku a na konci studie a poskytnou vzorek stolice na začátku a 3, 6 a 12 měsíců po FMT. Dysbióza a fekální bakteriální jsou určeny pomocí 16S rRNA genu PCR DNA amplifikace/hybridizace sondy pokrývající oblasti V3-V9.

Podrobný popis: Pacienti: Do studie bude zahrnuto dvě stě pacientů, kteří splňují kritéria Říma IV pro syndrom dráždivého tračníku (IBS). Zahrnou se všechny podtypy IBS s výjimkou IBS-U. Dárci: Výzkumníci vybrali 3 dárce (A, B a C) podle kritérií použitých v jejich předchozí randomizované dvojitě zaslepené, placebem kontrolované studii. Tato kritéria zahrnovala: být zdravým mužem nebo ženou bez anamnézy onemocnění a bez užívání léků, ve věku 20-50 let, být nekuřák a pravidelně cvičit. Rodily se vaginálním porodem a byly kojeny. Během života byli léčeni antibiotiky jen párkrát. Jsou vyšetřováni podle evropských pokynů pro dárce pro FMT. Než byli přijati jako dárci, byl analyzován bakteriální profil a dysbióza ve vzorku stolice pomocí testu dysbiózy GA-map s indexem dysbiózy (DI) = 1, což ukazuje na normobiosýzu. Jejich výkaly se během pokusu testují každý třetí měsíc, aby se vyloučila přenosná nemoc. Dárcem A je muž ve věku 41 let, dárcem B je žena ve věku 31 let a dárcem C je muž ve věku 35 let.

Protokol: Pacienti jsou randomizováni v poměru 1:1:1:1 do skupiny s placebem (pro příjem vlastních výkalů), aby dostali 90 g fekálního transplantátu od dárce A, od dárce B nebo dárce C. Fekální transplantace se podává do distálního duodena cestou pracovní kanál gastroskopu. Pacienti vyplní 5 dotazníků a dodají vzorky stolice na začátku a 3, 6 a 12 měsíců po FMT. Odběr, příprava a podání výkalů: Výkaly od dárců i pacientů se odeberou a skladují při -80ºC. Zmrazené dárcovské výkaly se rozmrazí v chladničce při 4 °C a každá 30g dávka se rozpustí ve 30 ml 4 °C studeného 0,9% sterilního fyziologického roztoku. Rozpuštěná stolice je pacientům podávána po nočním hladovění pracovním kanálem gastroduodenoskopu v pars descendens duodena vždy distálně od Vaterovy papily. Dotazníky

1. Stupnice závažnosti příznaků IBS (IBS-SSS).
2. Birminghamská škála symptomů.
3. Stupnice hodnocení únavy (FAS).
4. Dotazník IBS-kvalita života (IBSQoL).
5. Semikvantitativní dotazník frekvence jídla (FFQ)
6. Stupnice tvaru stolice Bristol

Bakteriální analýza: Fekální bakteriální analýza se provádí pomocí 16S rRNA genové PCR DNA amplifikace/hybridizace sondy pokrývající oblasti V3-V9. Extrakce DNA se provádí pomocí magnetických kuliček. DI je založeno na 54 DNA sondách zaměřených na více než 300 bakteriálních kmenů na základě jejich 16S rRNA sekvence v sedmi variabilních oblastech (V3-V9). 49 bakteriálních sond je druhově specifických, 19 detekuje bakterie na úrovni rodu a 9 sond detekuje bakterie na vyšších taxonomických úrovních. Značení sondy se provádí extenzí jednoho nukleotidu a hybridizací s komplementárními sondami spojenými s magnetickými kuličkami a detekcí signálu pomocí BioCode 1000A 128-Plex Analyzer (Applied BioCode, Santa Fe Springs, CA, USA). DI nad 2 ukazuje profil mikrobioty, který se liší od profilu normobiotické referenční sbírky (DI 1-2: nedysbióza, DI: střední, DI 4-5: těžká dysbióza).