O papel da seleção de doadores no resultado do transplante de microbiota fecal em pacientes com síndrome do intestino irritável

Breve resumo da descrição do estudo: Duzentos pacientes são randomizados 1:1:1:1 para placebo (próprias fezes), recebendo 90 g de transplante fecal do doador A, doador B ou doador C. O transplante fecal é administrado no duodeno distal através do canal de trabalho do um gastroscópio. Os pacientes devem preencher 5 questionários medindo sintomas, fadiga, qualidade de vida e ingestão de dieta na linha de base e no ponto final do estudo e fornecer uma amostra de fezes na linha de base e aos 3, 6 e 12 meses após o FMT. A disbiose e as bactérias fecais são determinadas usando amplificação de DNA por PCR do gene 16S rRNA/hibridização de sonda cobrindo as regiões V3-V9.

Descrição detalhada: Pacientes: Duzentos pacientes que atendem aos critérios de Roma IV para síndrome do intestino irritável (SII) serão incluídos no estudo. Todos os subtipos de IBS devem ser incluídos, com exceção do IBS-U. Doadores: Os investigadores selecionaram 3 doadores (A, B e C) de acordo com os critérios usados ​​em seu estudo anterior, randomizado, duplo-cego, controlado por placebo. Esses critérios incluíram: ser homem ou mulher saudável, sem histórico de doenças e sem uso de medicamentos, ter idade entre 20 e 50 anos, não fumar e praticar exercícios físicos regularmente. Eles nasceram de parto vaginal e foram amamentados. Eles foram tratados apenas algumas vezes com antibióticos durante a vida. Eles são selecionados de acordo com as diretrizes europeias para doadores para FMT. Antes de serem aceitos como doadores, o perfil bacteriano e a disbiose foram analisados ​​em uma amostra fecal por meio do teste de disbiose GA-map, com índice de disbiose (DI) = 1, indicando normobiose. Suas fezes serão testadas a cada três meses durante o ensaio para excluir doenças transmissíveis. O doador A é um homem de 41 anos, o doador B é uma mulher de 31 anos e o doador C é um homem de 35 anos.

Protocolo: Os pacientes são randomizados 1:1:1:1 em placebo (para receber suas próprias fezes), para receber 90 g de transplante fecal do doador A, do doador B ou doador C. O transplante fecal é administrado no duodeno distal através do canal de trabalho de um gastroscópio. Os pacientes deverão preencher 5 questionários e entregar amostras fecais no início do estudo e aos 3, 6 e 12 meses após o FMT. Coleta, preparo e administração de fezes: As fezes dos doadores e dos pacientes deverão ser coletadas e armazenadas a -80ºC. As fezes congeladas do doador devem ser descongeladas em geladeira a 4ºC, e cada porção de 30 g é dissolvida em 30 mL de soro fisiológico 0,9% estéril gelado a 4ºC. As fezes dissolvidas são administradas aos pacientes, após jejum noturno, através do canal de trabalho de um gastroduodenoscópio na parte descendente do duodeno sempre distal à papila de Vater. Questionários

1. Escala de gravidade dos sintomas de IBS (IBS-SSS).
2. Escala de sintomas de Birmingham.
3. Escala de Avaliação da Fadiga (FAS).
4. Questionário de qualidade de vida IBS (IBSQoL).
5. Questionário semiquantitativo de frequência alimentar (QFA)
6. Escala de formato de fezes de Bristol

Análise bacteriana: A análise bacteriana fecal é realizada usando uma técnica de amplificação/hibridização de sonda do gene 16S rRNA por PCR, cobrindo as regiões V3-V9. A extração de DNA é feita usando esferas magnéticas. DI é baseado em 54 sondas de DNA direcionadas a mais de 300 cepas bacterianas com base em sua sequência 16S rRNA em sete regiões variáveis ​​(V3-V9). Quarenta e nove sondas bacterianas são específicas da espécie, 19 detectam bactérias em nível de gênero e 9 sondas detectam bactérias em níveis taxonômicos mais elevados. A marcação da sonda é feita por extensão de nucleotídeo único e hibridização com sondas complementares acopladas a esferas magnéticas e detecção de sinal usando o analisador BioCode 1000A 128-Plex (Applied BioCode, Santa Fe Springs, CA, EUA). Um ID acima de 2 mostra um perfil de microbiota diferente daquele da coleção de referência normobiótica (DI 1-2: não disbiose, DI: moderado, DI 4-5: disbiose grave).