Il ruolo della selezione del donatore sull’esito del trapianto di microbiota fecale nei pazienti con sindrome dell’intestino irritabile

Descrizione dello studio Breve riassunto: Duecento pazienti vengono randomizzati 1:1:1:1 al placebo (proprie feci), ricevendo un trapianto fecale di 90 g dal donatore A, donatore B o donatore C. Il trapianto fecale viene somministrato al duodeno distale tramite il canale operativo di un gastroscopio. I pazienti dovranno completare 5 questionari che misurano sintomi, affaticamento, qualità della vita e assunzione di dieta al basale e al punto finale dello studio e fornire un campione di feci al basale e a 3, 6 e 12 mesi dopo l'FMT. La disbiosi e i batteri fecali vengono determinati utilizzando l'amplificazione/ibridazione della sonda PCR del gene 16S rRNA che copre le regioni V3-V9.

Descrizione dettagliata: Pazienti: saranno inclusi nello studio duecento pazienti che soddisfano i criteri di Roma IV per la sindrome dell'intestino irritabile (IBS). Devono essere inclusi tutti i sottotipi IBS ad eccezione di IBS-U. Donatori: i ricercatori hanno selezionato 3 donatori (A, B e C) secondo i criteri utilizzati nel loro precedente studio randomizzato in doppio cieco, controllato con placebo. Questi criteri includevano: essere un uomo o una donna sani senza storia di malattie e senza uso di farmaci, di età compresa tra 20 e 50 anni, non fumatori e attività fisica regolare. Sono nati con parto vaginale e allattati al seno. Sono stati trattati solo poche volte con antibiotici durante la loro vita. Sono selezionati secondo le linee guida europee per i donatori per FMT. Prima di essere accettati come donatori, il profilo batterico e la disbiosi sono stati analizzati in un campione fecale utilizzando il test di disbiosi GA-map, con un indice di disbiosi (DI) = 1, indicante normobiosi. Le loro feci saranno analizzate ogni terzo mese durante la sperimentazione per escludere malattie trasmissibili. Il donatore A è un maschio di 41 anni, il donatore B è una femmina di 31 anni e il donatore C è un maschio di 35 anni.

Protocollo: i pazienti vengono randomizzati 1:1:1:1 al placebo (per ricevere le proprie feci), per ricevere 90 g di trapianto fecale dal donatore A, dal donatore B o dal donatore C. Il trapianto fecale viene somministrato al duodeno distale tramite il canale lavorativo di un gastroscopio. I pazienti dovranno completare 5 questionari e consegnare campioni fecali al basale e a 3, 6 e 12 mesi dopo la FMT. Raccolta, preparazione e somministrazione delle feci: le feci sia dei donatori che dei pazienti devono essere raccolte e conservate a -80ºC. Le feci congelate del donatore devono essere scongelate in frigorifero a 4ºC e ciascuna porzione da 30 g viene sciolta in 30 mL di soluzione salina sterile fredda allo 0,9% a 4ºC. Le feci disciolte vengono somministrate ai pazienti, dopo una notte di digiuno, attraverso il canale operativo di un gastroduodenoscopio nella pars discendente del duodeno sempre distalmente alla papilla di Vater. Questionari

1. Scala di gravità dei sintomi dell'IBS (IBS-SSS).
2. Scala dei sintomi di Birmingham.
3. Scala di valutazione della fatica (FAS).
4. Questionario sulla qualità della vita dell'IBS (IBSQoL).
5. Questionario semiquantitativo sulla frequenza degli alimenti (FFQ)
6. Scala della forma delle feci Bristol

Analisi batterica: l'analisi batterica fecale viene eseguita utilizzando una tecnica di amplificazione/ibridazione con sonda del DNA PCR del gene 16S rRNA che copre le regioni V3-V9. L'estrazione del DNA viene effettuata utilizzando sfere magnetiche. DI si basa su 54 sonde di DNA mirate a più di 300 ceppi batterici in base alla loro sequenza di rRNA 16S in sette regioni variabili (V3-V9). Quarantanove sonde batteriche sono specie-specifiche, 19 rilevano batteri a livello di genere e 9 sonde rilevano batteri a livelli tassonomici più elevati. L'etichettatura della sonda avviene mediante estensione e ibridazione di un singolo nucleotide con sonde complementari accoppiate a sfere magnetiche e rilevamento del segnale utilizzando l'analizzatore BioCode 1000A 128-Plex (Applied BioCode, Santa Fe Springs, CA, USA). Un DI superiore a 2 mostra un profilo microbiotico che differisce da quello della raccolta di riferimento normobiotica (DI 1-2: non disbiosi, DI: moderato, DI 4-5: disbiosi grave).