Luovuttajien valinnan rooli ärtyvän suolen oireyhtymää sairastavien potilaiden ulosteen mikrobiotasiirron tuloksessa

Tutkimuksen kuvaus Lyhyt yhteenveto: Kaksisataa potilasta satunnaistetaan 1:1:1:1 lumelääkkeeseen (oma uloste), ja he saavat 90 g ulosteensiirtoa luovuttajalta A, luovuttaja B tai luovuttaja C. Ulosteensiirto annostellaan distaaliseen pohjukaissuoleen työkanavan kautta. gastroskooppi. Potilaiden on täytettävä viisi kyselylomaketta, joissa mitataan oireita, väsymystä, elämänlaatua ja ruokavalion saantia tutkimuksen alkuvaiheessa ja loppuvaiheessa, ja annettava ulostenäyte lähtötilanteessa ja 3, 6 ja 12 kuukauden kuluttua FMT:stä. Dysbioosi ja ulostebakteeri määritetään käyttämällä 16S-rRNA-geenin PCR DNA-amplifikaatiota/koetinhybridisaatiota, joka kattaa alueet V3-V9.

Yksityiskohtainen kuvaus: Potilaat: Kaksisataa potilasta, jotka täyttävät ärtyvän suolen oireyhtymän (IBS) Rooma IV -kriteerit, otetaan mukaan tutkimukseen. Kaikki IBS-alatyypit on sisällytettävä IBS-U:ta lukuun ottamatta. Luovuttajat: Tutkijat ovat valinneet 3 luovuttajaa (A, B ja C) edellisessä satunnaistetussa lumekontrolloidussa kaksoissokkotutkimuksessaan käytettyjen kriteerien mukaisesti. Näihin kriteereihin kuuluivat: terve mies tai nainen, jolla ei ole aiempia sairauksia eikä lääkkeitä, iältään 20-50 vuotta, tupakoimattomuus ja säännöllinen kuntoilu. Ne synnytettiin emättimen kautta ja imetettiin. Heitä hoidettiin antibiooteilla vain muutaman kerran elämänsä aikana. Ne seulotaan FMT:n luovuttajille annettujen eurooppalaisten ohjeiden mukaisesti. Ennen luovuttajien hyväksymistä bakteeriprofiili ja dysbioosi analysoitiin ulostenäytteestä GA-kartan dysbioositestillä, jonka dysbioosiindeksi (DI) = 1, mikä viittaa normobioosiin. Heidän ulostensa on tutkittava joka kolmas kuukausi kokeen aikana tartuntatautien poissulkemiseksi. Luovuttaja A on 41-vuotias mies, luovuttaja B on 31-vuotias nainen ja luovuttaja C on 35-vuotias mies.

Protokolla: Potilaat satunnaistetaan suhteessa 1:1:1:1 lumelääkkeeseen (saakseen omat ulosteensa), jotta he saavat 90 g ulosteensiirtoa luovuttajalta A, luovuttajalta B tai luovuttaja C. Ulosteensiirto annetaan distaaliseen pohjukaissuoleen gastroskoopin työkanava. Potilaiden on täytettävä 5 kyselylomaketta ja toimitettava ulostenäytteet lähtötilanteessa sekä 3, 6 ja 12 kuukautta FMT:n jälkeen. Ulosteiden kerääminen, valmistelu ja annostelu: Ulosteet sekä luovuttajilta että potilailta kerätään ja säilytetään -80 ºC:ssa. Jäädytetyt luovuttajan ulosteet sulatetaan jääkaapissa 4 ºC:ssa ja kukin 30 g:n annos liuotetaan 30 ml:aan 4 ºC kylmää 0,9 % steriiliä suolaliuosta. Liuennut uloste annetaan potilaille yön paaston jälkeen gastroduodenoskoopin työkanavan kautta pohjukaissuolen pars descendensissä aina Vaterin papillasta distaalisesti. Kyselylomakkeet

1. IBS-oireiden vakavuusasteikko (IBS-SSS).
2. Birminghamin oireiden asteikko.
3. Väsymysarviointiasteikko (FAS).
4. IBS-elämänlaatukysely (IBSQoL).
5. Puolikvantitiivinen ruoan tiheyskysely (FFQ)
6. Bristol ulosteen muoto-asteikko

Bakteerianalyysi: Ulostebakteerianalyysi suoritetaan käyttämällä 16S rRNA-geenin PCR DNA:n monistus/koetinhybridisaatiotekniikkaa, joka kattaa alueet V3-V9. DNA-uutto tehdään käyttämällä magneettihelmiä. DI perustuu 54 DNA-koettimeen, jotka kohdistuvat yli 300 bakteerikantaan perustuen niiden 16S-rRNA-sekvenssiin seitsemällä vaihtelevalla alueella (V3-V9). Neljäkymmentäyhdeksän bakteerikoetinta on lajispesifisiä, 19 havaitsee bakteerit suvun tasolla ja 9 koetinta havaitsee bakteereita korkeammilla taksonomisilla tasoilla. Koettimen leimaus tapahtuu yhden nukleotidin pidentämisellä ja hybridisaatiolla komplementaarisiin koettimiin, jotka on kytketty magneettihelmiin, ja signaalin havaitseminen käyttämällä BioCode 1000A 128-Plex Analyzer -laitetta (Applied BioCode, Santa Fe Springs, CA, USA). Yli 2 oleva DI osoittaa mikrobiotaprofiilin, joka eroaa normobioottisen vertailukokoelman profiilista (DI 1-2: ei-dysbioosi, DI: kohtalainen, DI 4-5: vaikea dysbioosi).