Роль отбора донора в исходе трансплантации фекальной микробиоты у пациентов с синдромом раздраженного кишечника

Краткое описание исследования: Двести пациентов рандомизированы в соотношении 1:1:1:1 в группу плацебо (собственные фекалии), получив 90 г фекального трансплантата от донора А, донора В или донора С. Фекальный трансплантат вводится в дистальный отдел двенадцатиперстной кишки через рабочий канал гастроскоп. Пациенты должны заполнить 5 анкет, измеряющих симптомы, утомляемость, качество жизни и рацион питания в начале и в конце исследования, а также предоставить образец кала в начале исследования, а также через 3, 6 и 12 месяцев после ТФМ. Дисбиоз и фекальную бактериальность определяют с помощью ПЦР-амплификации ДНК/зондовой гибридизации гена 16S рРНК, охватывающей области V3-V9.

Подробное описание: Пациенты: В исследование должны быть включены двести пациентов, которые соответствуют Римским критериям IV синдрома раздраженного кишечника (СРК). Должны быть включены все подтипы СРК, за исключением СРК-U. Доноры: Исследователи выбрали 3 доноров (A, B и C) в соответствии с критериями, использованными в их предыдущем рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании. Эти критерии включали: быть здоровым мужчиной или женщиной, не имеющими заболеваний в анамнезе и не принимавшими лекарства, в возрасте 20–50 лет, некурящим и регулярно занимающимся спортом. Они рожали естественным путем и находились на грудном вскармливании. За свою жизнь их лечили антибиотиками всего несколько раз. Они проходят скрининг в соответствии с европейскими рекомендациями для доноров по ТФМ. Прежде чем их приняли в качестве доноров, бактериальный профиль и дисбактериоз анализировали в образце фекалий с использованием теста на дисбактериоз GA-карты с индексом дисбиоза (DI) = 1, что указывает на нормобиоз. Их фекалии должны проверяться каждые три месяца во время исследования, чтобы исключить инфекционные заболевания. Донор А — мужчина в возрасте 41 года, донор Б — женщина в возрасте 31 года и донор С — мужчина в возрасте 35 лет.

Протокол: Пациенты рандомизированы 1:1:1:1 в группы плацебо (для получения собственных фекалий), для получения 90-граммового трансплантата кала от донора А, от донора В или донора С. Трансплантант кала вводится в дистальный отдел двенадцатиперстной кишки через рабочий канал гастроскопа. Пациенты должны заполнить 5 анкет и сдать образцы кала исходно, а также через 3, 6 и 12 месяцев после ТФМ. Сбор, подготовка и введение фекалий: Фекалии как доноров, так и пациентов должны собираться и храниться при температуре - 80°C. Замороженные донорские фекалии размораживают в холодильнике при температуре 4°С и каждую порцию массой 30 г растворяют в 30 мл холодного 0,9% стерильного физиологического раствора при температуре 4°С. Растворенный стул вводят больным после ночного голодания через рабочий канал гастродуоденоскопа в нисходящую часть двенадцатиперстной кишки, всегда дистальнее фатерова сосочка. Анкеты

1. Шкала тяжести симптомов СРК (IBS-SSS).
2. Бирмингемская шкала симптомов.
3. Шкала оценки усталости (FAS).
4. Опросник качества жизни СРК (IBSQoL).
5. Полуколичественный опросник частоты приема пищи (FFQ)
6. Бристольская шкала формы стула

Бактериальный анализ. Бактериальный анализ фекалий проводят с использованием метода амплификации/зондовой гибридизации ДНК ПЦР гена 16S рРНК, охватывающего области V3-V9. Экстракция ДНК осуществляется с помощью магнитных шариков. DI основан на 54 зондах ДНК, нацеленных на более чем 300 бактериальных штаммов на основе их последовательности 16S рРНК в семи вариабельных областях (V3-V9). Сорок девять бактериальных зондов являются видоспецифичными, 19 обнаруживают бактерии на уровне рода, а 9 зондов обнаруживают бактерии на более высоких таксономических уровнях. Маркировка зондов осуществляется путем удлинения одного нуклеотида и гибридизации с комплементарными зондами, связанными с магнитными шариками, а также обнаружения сигнала с помощью анализатора BioCode 1000A 128-Plex (Applied BioCode, Санта-Фе-Спрингс, Калифорния, США). DI выше 2 указывает на профиль микробиоты, который отличается от профиля нормобиотической эталонной коллекции (DI 1–2: отсутствие дисбактериоза, DI: умеренный, DI 4–5: тяжелый дисбиоз).