寻找胎儿筛窦上皮内的嗅觉细胞 (COEF)

该研究项目基于这样的假设：嗅上皮存在于筛外侧块的粘膜内，类似于胎儿器官发生期开始时的嗅裂，在妊娠早期结束时在筛外侧块中逐渐消失当它们形成时。

本研究旨在进行描述性研究，目的是识别胎儿嗅上皮并评估其在筛窦粘膜内随着胎儿年龄的增长而发生的分布变化。

进行这项研究所选择的方法依赖于使用胎儿筛骨（整个身体或仅头肢，取决于样本大小）的标准光学显微镜进行组织学分析，以保留其结构。 显微镜分析将与免疫组织化学或免疫荧光技术相结合，以表征感兴趣的细胞：初级嗅觉神经元。

样本收集将是前瞻性的，胎儿的招募将在整个研究过程中进行，跨度为 18 至 24 个月。 预计最小样本量为 20 个案例。 如果没有提供样品或有足够数量的样品来满足主要和次要目标，则计划进行中间分析。

这些样本是从药物或手术人工流产手术中获得的胎儿产品，孕龄至少为闭经 7 周，最长为 14 周 + 6 天。

样本招募计划在南锡大学医院妇产科的矫形服务中进行，纳入现有的服务方案（医疗或手术流产），并在研究人员提供明确和公平的信息并获得患者的书面知情同意后进行。 相关医疗团队被告知正在进行的研究。 应尽可能减少研究对患者护理的影响，以避免扰乱患者的治疗过程和正在进行的医疗程序。 本方案或现场调查人员（如有必要）不得修改或干扰任何治疗方案。

根据法国国家卫生局 (HAS) 提供并经法国国家妇产科学院 (CNGOF) 验证的 2021 年更新的良好实践建议，每次堕胎手术都包括在堕胎手术后 5 天内进行事先医疗咨询一个女人的请求。 该咨询会在手术前几天进行，旨在向患者提供有关手术本身的信息，并解决成功执行手术所需的临床和临床旁医学先决条件。 在此期间，调查人员不会进行干预以尊重医疗程序的正确实施，这需要一个关键的信息期，在此期间最好避免干扰。

计划在患者进入妇产科门诊部时提供有关所进行的研究的患者信息并获得书面同意。 这一阶段由调查人员负责，在医疗和辅助医疗团队入院后以简短的口头访谈形式进行。 它记录在符合法律机构指令的纸质文件中，一式两份，一份由 DRCI（临床研究和创新部门）的研究人员保留，另一份由患者保留。

调查人员在访谈后记录末次月经的日期。 这是从住院患者收集的唯一个人或医疗数据。 一旦根据矫形服务从业者制定的医疗方案完成手术（医疗或外科），排出或抽吸产物将被收集并立即放入密封的生物病理收集容器中，同时仍保持新鲜。

每个样本都标有包含编号：COEF#N° 以及从末次月经日期计算的孕周（以周为单位）。 这些数据在医院机构安全计算机上的 Excel® 电子表格中系统地编制索引。 研究人员立即将样本运送至南锡大学妇产医院胎儿病理实验室，在-80°C下快速冷冻。 在双目显微镜下对产品进行初步检查，以分离出感兴趣的胎儿材料：整个身体、完整或碎片的头肢，包括完整的面部肿块。

计划对每个样品的调节进行标准化。 招募 10 个病例后，使用特定的 Cryocut® 切片机对冷冻样本进行冷冻切片程序。 此步骤允许创建厚度约为 5 微米的连续切片，安装在载玻片上。 采用标准 HES 染色的初始临时检查阶段能够精确识别筛骨块，并随后创建一系列冠状切片。 在这个发育阶段，骨骼结构没有骨化，避免了脱钙阶段。 每张制作的载玻片都标有“研究编号”，由计算机分配并由实验室使用的组织学分析软件自动给出：Ariane SX®。 这些数字还根据样本数据（COEF#N° 和胎龄）进行电子索引。

由此产生的一系列载玻片用免疫组织化学或免疫荧光技术进行处理。

计划的免疫组织学标记物包括：突触素（SP）、神经特异性烯醇化酶（NSE）、神经元细胞粘附分子（NCAM）和少突胶质细胞转录因子（OLIG2）。 这些标记物是文献中引用的已知单克隆抗体，用于识别成熟和未成熟的初级嗅觉神经元。

对载玻片进行标记后，将它们通过照相扫描仪，生成包含每个样本获得的所有图像的数字文件。 每个文件的标题根据每个样本的索引号：COEF#N°。 记录的图像文件带有相应的幻灯片“研究”编号。

鉴于本研究纯粹是描述性的，因此计划进行描述性统计。

分析后，每个系列的载玻片均在研究人员负责的胎儿病理学实验室中物理储存在 4°C 下。 研究结束时，这些幻灯片将被分组保存在洛林生物资源中心的专门收藏中。