Hledejte čichové buňky ve fetálním etmoidním epitelu (COEF)

Tento výzkumný projekt je založen na hypotéze, že čichový epitel je přítomen ve sliznici laterálních etmoidálních mas, podobně jako čichové štěrbiny na začátku období organogeneze plodu, postupně mizí před koncem prvního trimestru v laterálních etmoidálních masách. jak se tvoří.

Tato studie si klade za cíl být popisná s cílem identifikovat tento fetální čichový epitel a zhodnotit změny jeho distribuce v etmoidální sliznici s progresí fetálního věku.

Zvolená metoda pro provedení této studie spoléhá na histologickou analýzu pomocí standardního optického mikroskopu fetálních etmoidů (celých těl nebo pouze cefalické končetiny v závislosti na velikosti vzorku), aby byla zachována jejich architektura. Mikroskopická analýza bude spojena s imunohistochemickými nebo imunofluorescenčními technikami k charakterizaci zájmových buněk: primárních čichových neuronů.

Odběr vzorků bude prospektivní, s náborem plodů rozloženým v průběhu studie, trvající 18 až 24 měsíců. Předpokládaná minimální velikost vzorku je 20 případů. Průběžné analýzy se plánují v případě nepřispění vzorků nebo v případě dostatečného počtu vzorků ke splnění primárních a sekundárních cílů.

Vzorky jsou fetální produkty získané buď z lékařských nebo chirurgických interrupčních procedur, s gestačním věkem minimálně 7 týdnů amenorey a až 14 týdnů + 6 dnů.

Nábor vzorků se plánuje uskutečnit v rámci Orthogeny Service Fakultní nemocnice Porodnice v Nancy, integrován do stávajících servisních protokolů (lékařské nebo chirurgické potraty) a po jasných a spravedlivých informacích a získání písemného informovaného souhlasu od pacientů vyšetřovateli. Příslušné zdravotnické týmy jsou informovány o probíhajícím výzkumu. Dopad výzkumu na péči o pacienta by měl být co nejvíce minimalizován, aby nedošlo k narušení procesu pacienta a prováděného lékařského postupu. Tímto protokolem nebo, je-li to nutné, zkoušejícími na místě by neměly být upravovány ani rušeny žádné léčebné protokoly.

V souladu s aktualizací Doporučení správné praxe z roku 2021 poskytnutých Francouzským národním úřadem pro zdraví (HAS) a schválených Francouzskou národní fakultou gynekologie a porodnictví (CNGOF) zahrnuje každý potratový postup předchozí lékařskou konzultaci konanou do 5 dnů po žádost ženy. Tato konzultace předchází zákroku o několik dní a má za cíl poskytnout pacientům informace o samotném zákroku a řešit klinické a paraklinické lékařské předpoklady nutné pro jeho úspěšné provedení. Během této doby nedochází k žádnému zásahu ze strany vyšetřovatelů, který by respektoval řádné provádění lékařského postupu, což vyžaduje zásadní informační období, během něhož je lepší se rušení vyhnout.

Informování pacienta o provedeném výzkumu a získání písemného souhlasu je plánováno při příjmu pacientek na Gynekologicko-porodnickou ambulanci. Tato fáze ve formě krátkého ústního pohovoru po jejich přijetí lékařským a nelékařským týmem je v kompetenci vyšetřovatelů. Je zdokumentováno v papírovém dokumentu, který je v souladu se směrnicemi zákonného zařízení, vyhotoveném ve dvou vyhotoveních, přičemž jednu kopii si ponechají zkoušející pro DRCI (oddělení klinického výzkumu a inovací) a druhou si ponechá pacient.

Datum poslední menstruace zaznamenají vyšetřovatelé po rozhovoru. Toto jsou jediné osobní nebo lékařské údaje shromážděné od hospitalizovaných pacientů. Jakmile je procedura dokončena (lékařská nebo chirurgická) podle lékařského protokolu stanoveného praktiky v Orthogeny Service, expulzní nebo aspirační produkty jsou shromážděny a okamžitě umístěny do uzavřené biopatologické sběrné nádoby, dokud jsou ještě čerstvé.

Každý vzorek je označen inkluzním číslem: COEF#N° a gestačním věkem v týdnech počítaným od data poslední menstruace. Tato data jsou systematicky indexována v tabulce Excel® na zabezpečeném počítači v nemocničním zařízení. Vzorek je okamžitě transportován vyšetřovateli do fetální patologické laboratoře Fakultní nemocnice Mateřství v Nancy k rychlému zmrazení na -80 °C. Provádí se předběžné vyšetření produktů pod binokulárním mikroskopem, aby se izoloval zájmový fetální materiál: celá těla, úplné nebo fragmentované cefalické končetiny, včetně neporušené hmoty obličeje.

Kondicionování každého vzorku je plánováno jako standardizované. Po náboru 10 případů jsou zmrazené vzorky podrobeny postupu kryosekce pomocí specifického mikrotomu Cryocut®. Tento krok umožňuje vytvoření sériových řezů o tloušťce přibližně 5 mikrometrů, upevněných na podložní sklíčka. Úvodní extemporální vyšetřovací fáze se standardním HES barvením umožňuje přesnou identifikaci etmoidního bloku a následně vytvoření série koronálních řezů. V této fázi vývoje nejsou kosterní struktury zkostnatělé, takže nedochází k fázi odvápnění. Každé vyrobené sklíčko je označeno „číslem výzkumu“, přiděleným počítačem a automaticky přiděleným softwarem pro histologickou analýzu používaným laboratoří: Ariane SX®. Tato čísla jsou také elektronicky indexována ve vztahu k údajům vzorku (COEF#N° a gestační věk).

Takto vytvořené série preparátů jsou ošetřeny imunohistochemickými nebo imunofluorescenčními technikami.

Mezi plánované imunohistologické markery patří: Synaptophysin (SP), neurospecifická enoláza (NSE), neuronální buněčná adhezní molekula (NCAM) a oligodendrocytový transkripční faktor (OLIG2). Tyto markery jsou známé monoklonální protilátky uváděné v literatuře pro identifikaci zralých a nezralých primárních čichových neuronů.

Po označení diapozitivů procházejí fotografickým skenerem, aby se vytvořil digitální soubor obsahující všechny obrázky získané pro každý vzorek. Každý soubor je pojmenován podle indexového čísla každého vzorku: COEF#N°. Zaznamenané obrazové soubory nesou odpovídající číslo snímku „Výzkum“.

Vzhledem k čistě deskriptivní povaze této studie se plánují deskriptivní statistiky.

Po analýze se každá série sklíček fyzicky skladuje při teplotě 4 °C v laboratoři fetální patologie pod odpovědností zkoušejících. Na konci studie budou tyto snímky seskupeny pro uchování v rámci vyhrazené sbírky v Lorraine Biological Resources Center.