Keressen szaglósejteket a magzati ethmoid epitéliumban (COEF)

Ez a kutatás azon a hipotézisen alapul, hogy a szaglóhám az oldalsó ethmoid tömegek nyálkahártyáján belül van jelen, hasonlóan a magzati organogenezis periódusának kezdetén a szaglórepedésekhez, fokozatosan eltűnve az első trimeszter vége előtt az oldalsó ethmoid tömegekben. ahogy kialakulnak.

Ez a tanulmány leíró jellegű, azzal a céllal, hogy azonosítsa ezt a magzati szaglóhámot, és felmérje az ethmoidális nyálkahártyán belüli eloszlási változásait a magzati életkor előrehaladtával.

A vizsgálat elvégzésére választott módszer a magzati ethmoidok (a minta méretétől függően az egész testek vagy csak a fej végtagok) szabványos optikai mikroszkópjával végzett szövettani elemzésen alapul, hogy megőrizze szerkezetüket. A mikroszkópos analízist immunhisztokémiai vagy immunfluoreszcens technikákkal kapcsolják össze, hogy jellemezzék a kérdéses sejteket: az elsődleges szaglóneuronokat.

A mintagyűjtés várható lesz, a magzatok felvétele a vizsgálat során megoszlik, 18-24 hónapig. A várható minimális mintanagyság 20 eset. Közbenső elemzéseket tervezünk abban az esetben, ha a minták nem járulnak hozzá, vagy ha elegendő számú minta áll rendelkezésre az elsődleges és másodlagos célok teljesítéséhez.

A minták olyan magzati termékek, amelyeket akár orvosi, akár sebészeti indukált abortusszal nyernek, és a terhességi kor legalább 7 hetes amenorrhoea és legfeljebb 14 hét + 6 nap.

A mintafelvételre a tervek szerint a Nancy-i Egyetemi Kórház Szülési Ortogenetikai Szolgálatán belül kerül sor, a meglévő szolgáltatási protokollokba (orvosi vagy sebészeti abortuszok) integrálva, világos és tisztességes tájékoztatást, valamint a betegektől a vizsgálók írásos beleegyezését követően. Az érintett egészségügyi csoportok tájékoztatást kapnak a folyamatban lévő kutatásról. A kutatás betegellátásra gyakorolt ​​hatását a lehető legkisebbre kell csökkenteni, hogy elkerüljük a betegek folyamatának és az elvégzett orvosi eljárás megzavarását. Ez a protokoll vagy szükség esetén a helyszíni vizsgálók nem módosíthatják vagy zavarhatják meg a kezelési protokollokat.

A Francia Nemzeti Egészségügyi Hatóság (HAS) által kiadott és a Francia Nemzeti Nőgyógyászati ​​és Szülészeti Főiskola (CNGOF) által jóváhagyott helyes gyakorlati ajánlások 2021-es frissítésével összhangban minden abortusz-eljárás magában foglal egy előzetes orvosi konzultációt, amelyet a következő 5 napon belül tartanak. női kérés. Ez a konzultáció néhány nappal megelőzi a beavatkozást, és célja, hogy magáról a beavatkozásról tájékoztassa a betegeket, és foglalkozzon a sikeres lebonyolításához szükséges klinikai és paraklinikai orvosi előfeltételekkel. Ezalatt az idő alatt a vizsgálók nem avatkoznak be az orvosi eljárás megfelelő végrehajtásának tiszteletben tartása érdekében, ami döntő fontosságú tájékoztatási időszakot igényel, amely alatt a beavatkozást célszerű elkerülni.

Az elvégzett kutatásról a betegtájékoztatás és az írásbeli hozzájárulás megszerzése a tervek szerint a Nőgyógyászati ​​és Szülészeti Ambuláns Osztályra történő felvételkor történik. Ez a szakasz, amely egy rövid szóbeli meghallgatás formájában történik, miután az orvosi és a mentős csoportok befogadták őket, a vizsgálók felelőssége. Ezt egy papíralapú dokumentumban dokumentálják, amely megfelel a törvényes letelepedési irányelveknek, és két példányban készült, amelynek egyik példányát a DRCI (Klinikai Kutatási és Innovációs Osztály) vizsgálói, a másodikat pedig a páciens őrizte meg.

Az utolsó menstruáció időpontját a kihallgatás után rögzítik a vizsgálók. Ez az egyetlen személyes vagy egészségügyi adat, amelyet kórházi betegektől gyűjtenek. Az Ortogenetikai Szolgálat orvosai által felállított orvosi protokoll szerint az eljárás (orvosi vagy sebészeti) befejezése után a kilökődési vagy aspirációs termékeket összegyűjtik, és még frissen egy lezárt biopatológiai gyűjtőedénybe helyezik.

Minden mintán szerepel egy felvételi szám: COEF#N° és a terhességi kor hetekben az utolsó menstruáció dátumától számítva. Ezeket az adatokat módszeresen indexeli egy Excel® táblázat a kórházi létesítmény biztonságos számítógépén. A mintát a vizsgálók azonnal a Nancy-i Egyetemi Kórház Maternity Magzati Patológiai Laboratóriumába szállítják, ahol -80°C-on gyorsan lefagyasztják. A termékek binokuláris mikroszkóp alatti előzetes vizsgálatát végzik el, hogy elkülönítsék a magzat érdeklődésére számot tartó anyagot: egész testeket, teljes vagy töredezett fejvégtagokat, beleértve az ép arctömeget is.

Az egyes minták kondicionálását a tervek szerint szabványosítják. 10 eset toborzása után a fagyasztott mintákat egy specifikus Cryocut® mikrotom segítségével kriometszésnek vetik alá. Ez a lépés lehetővé teszi körülbelül 5 mikrométer vastagságú, üveglemezekre szerelt soros metszetek létrehozását. Egy kezdeti extemporális vizsgálati fázis standard HES festéssel lehetővé teszi az ethmoid blokk pontos azonosítását, majd egy sor koronális metszet létrehozását. A fejlődés ezen szakaszában a vázszerkezetek nem csontosodnak el, elkerülve a vízkőtelenítési fázist. Minden legyártott tárgylemezt "kutatási számmal" jelölnek meg, amelyet számítógéppel hozzárendelnek, és a laboratórium által használt szövettani elemző szoftver: Ariane SX® automatikusan megad. Ezeket a számokat a mintaadatokhoz (COEF#N° és terhességi kor) vonatkozóan elektronikusan is indexeljük.

Az így elkészített tárgylemezsorozatokat immunhisztokémiai vagy immunfluoreszcens technikákkal kezelik.

A tervezett immunhisztológiai markerek a következők: szinaptofizin (SP), neurospecifikus enoláz (NSE), neuronális sejtadhéziós molekula (NCAM) és oligodendrocita transzkripciós faktor (OLIG2). Ezek a markerek ismert monoklonális antitestek, amelyekre az irodalomban hivatkoznak az érett és éretlen primer szaglóneuronok azonosítására.

A tárgylemezek felcímkézése után áthaladnak egy fényképes szkenneren, hogy létrehozzanak egy digitális fájlt, amely tartalmazza az egyes mintákhoz kapott összes képet. Minden fájl címe az egyes minták indexelési száma szerint van: COEF#N°. A rögzített képfájlokon a megfelelő „Kutatás” diaszám szerepel.

Tekintettel a tanulmány tisztán leíró jellegére, leíró statisztikákat tervezünk.

Az elemzés után minden tárgylemez-sorozatot fizikailag 4°C-on tárolnak a Magzati Patológiai Laboratóriumban, a vizsgálók felelőssége mellett. A tanulmány végén ezeket a diákat megőrzés céljából csoportosítják a Lorraine Biological Resources Center erre a célra szolgáló gyűjteményében.