Zoek naar reukcellen in het foetale ethmoïde epitheel (COEF)

Dit onderzoeksproject is gebaseerd op de hypothese dat reukepitheel aanwezig is in het slijmvlies van de laterale ethmoidmassa's, vergelijkbaar met de reukspleten aan het begin van de foetale organogenese, en geleidelijk verdwijnt vóór het einde van het eerste trimester in de laterale ethmoidmassa's. zoals ze zich vormen.

Deze studie heeft een beschrijvend karakter, met als doel dit foetale reukepitheel te identificeren en de veranderingen in de distributie ervan binnen het ethmoïdale slijmvlies te beoordelen naarmate de foetale leeftijd vordert.

De gekozen methode voor het uitvoeren van dit onderzoek is gebaseerd op histologische analyse met behulp van een standaard optische microscoop van foetale ethmoïden (hele lichamen of alleen het hoofduiteinde, afhankelijk van de monstergrootte) om hun architectuur te behouden. Microscopische analyse zal worden gekoppeld aan immunohistochemie of immunofluorescentietechnieken om de cellen van belang te karakteriseren: primaire reukneuronen.

Het verzamelen van monsters zal prospectief zijn, waarbij de rekrutering van foetussen gespreid is over de loop van het onderzoek, dat 18 tot 24 maanden beslaat. De verwachte minimale steekproefomvang bedraagt ​​20 gevallen. Er worden tussentijdse analyses gepland als er geen monsters worden ingeleverd of als er voldoende monsters zijn om aan de primaire en secundaire doelstellingen te voldoen.

De monsters zijn foetale producten verkregen uit medische of chirurgische abortusprocedures, met een zwangerschapsduur van minimaal 7 weken amenorroe en maximaal 14 weken + 6 dagen.

Het is de bedoeling dat de rekrutering van monsters zal plaatsvinden binnen de Orthogeniedienst van het Universitair Ziekenhuis Moederschap in Nancy, geïntegreerd in bestaande serviceprotocollen (medische of chirurgische abortussen), en na duidelijke en eerlijke informatie en het verkrijgen van schriftelijke geïnformeerde toestemming van de patiënten door de onderzoekers. De betrokken zorgteams worden geïnformeerd over het lopende onderzoek. De impact van het onderzoek op de patiëntenzorg moet zoveel mogelijk worden geminimaliseerd om verstoring van het patiëntenproces en de medische procedure die wordt uitgevoerd te voorkomen. Er mogen geen behandelingsprotocollen worden gewijzigd of verstoord door dit protocol of, indien nodig, door de onderzoekers ter plaatse.

In overeenstemming met de update van 2021 van de aanbevelingen voor goede praktijken, opgesteld door de Franse Nationale Autoriteit voor Gezondheid (HAS) en gevalideerd door het Franse Nationale College voor Gynaecologie en Verloskunde (CNGOF), omvat elke abortusprocedure een voorafgaand medisch consult dat wordt gehouden binnen vijf dagen na de abortus. een verzoek van een vrouw. Dit overleg gaat enkele dagen vooraf aan de procedure en heeft tot doel de patiënten informatie te verstrekken over de procedure zelf en de klinische en paraklinische medische vereisten te behandelen die nodig zijn voor de succesvolle uitvoering ervan. Gedurende deze tijd is er geen tussenkomst van de onderzoekers om de juiste uitvoering van de medische procedure te respecteren, wat een cruciale informatieperiode vereist waarin interferentie bij voorkeur moet worden vermeden.

Het is de bedoeling dat patiënteninformatie over het uitgevoerde onderzoek en het verkrijgen van schriftelijke toestemming plaatsvinden bij opname van de patiënt op de polikliniek Gynaecologie en Verloskunde. Deze fase, in de vorm van een kort mondeling interview na hun opname door de medische en paramedische teams, valt onder de verantwoordelijkheid van de onderzoekers. Het is gedocumenteerd in een papieren document dat voldoet aan de wettelijke vestigingsrichtlijnen, dat in tweevoud wordt geproduceerd, waarbij één exemplaar wordt bewaard door de onderzoekers voor de DRCI (afdeling Klinisch Onderzoek en Innovatie) en het tweede exemplaar wordt bewaard door de patiënt.

De datum van de laatste menstruatie wordt na het interview door de onderzoekers geregistreerd. Dit zijn de enige persoonlijke of medische gegevens die worden verzameld van gehospitaliseerde patiënten. Zodra de procedure (medisch of chirurgisch) is voltooid volgens het medische protocol dat is opgesteld door de beoefenaars van de dienst Orthogenie, worden de uitdrijvings- of aspiratieproducten verzameld en onmiddellijk in een afgesloten biopathologische verzamelcontainer geplaatst terwijl ze nog vers zijn.

Elk monster is gemarkeerd met een insluitingsnummer: COEF#N° en de zwangerschapsduur in weken, berekend vanaf de datum van de laatste menstruatie. Deze gegevens worden systematisch geïndexeerd in een Excel®-spreadsheet op een beveiligde computer in het ziekenhuis. Het monster wordt onmiddellijk door de onderzoekers vervoerd naar het Laboratorium voor Foetale Pathologie van het Universitair Ziekenhuis Maternity in Nancy, waar het snel wordt ingevroren bij -80°C. Er wordt een voorlopig onderzoek van de producten onder een binoculaire microscoop uitgevoerd om het interessante foetale materiaal te isoleren: hele lichamen, volledige of gefragmenteerde hoofduiteinden, inclusief de intacte gezichtsmassa.

Het is de bedoeling dat de conditionering van elk monster wordt gestandaardiseerd. Na de rekrutering van 10 gevallen worden ingevroren monsters onderworpen aan een cryosectieprocedure met behulp van een specifiek Cryocut®-microtoom. Met deze stap kunnen seriële secties worden gemaakt met een dikte van ongeveer 5 micrometer, gemonteerd op glasplaatjes. Een initiële onderzoeksfase met standaard HES-kleuring maakt de nauwkeurige identificatie van het ethmoidblok mogelijk en vervolgens de creatie van een reeks coronale secties. In dit ontwikkelingsstadium zijn de skeletstructuren niet verbeend, waardoor een ontkalkingsfase wordt vermeden. Elk geproduceerd objectglaasje wordt gemarkeerd met een 'onderzoeksnummer', dat door de computer wordt toegewezen en automatisch wordt toegekend door de histologische analysesoftware die door het laboratorium wordt gebruikt: Ariane SX®. Deze cijfers worden ook elektronisch geïndexeerd in relatie tot de monstergegevens (COEF#N° en zwangerschapsduur).

De aldus gemaakte reeks objectglaasjes worden behandeld met immunohistochemie of immunofluorescentietechnieken.

De geplande immunohistologische markers omvatten: Synaptophysin (SP), Neurospecific Enolase (NSE), Neuronal Cell Adhesion Molecule (NCAM) en Oligodendrocyt Transcription Factor (OLIG2). Deze markers zijn bekende monoklonale antilichamen waarnaar in de literatuur wordt verwezen voor het identificeren van volwassen en onrijpe primaire reukneuronen.

Nadat de objectglaasjes zijn geëtiketteerd, worden ze door een fotografische scanner gevoerd om een ​​digitaal bestand te genereren met alle afbeeldingen die voor elk monster zijn verkregen. Elk bestand krijgt de titel overeenkomstig het indexnummer van elk monster: COEF#N°. De opgenomen beeldbestanden dragen het overeenkomstige dia-nummer "Onderzoek".

Gezien het puur beschrijvende karakter van dit onderzoek zijn beschrijvende statistieken gepland.

Na analyse wordt elke serie objectglaasjes fysiek bewaard bij 4°C in het Laboratorium voor Foetale Pathologie, onder de verantwoordelijkheid van de onderzoekers. Aan het einde van het onderzoek zullen deze dia's worden gegroepeerd voor bewaring in een speciale collectie in het Lorraine Biological Resources Centre.