태아 사골 상피 내의 후각 세포 검색 (COEF)

이 연구 프로젝트는 후각 상피가 측면 사골 종괴의 점막 내에 존재하며, 태아 기관 형성 기간 초기의 후각 균열과 유사하며, 측면 사골 종괴의 첫 번째 삼 분기가 끝나기 전에 점차 사라진다는 가설을 기반으로 합니다. 그들이 형성하는대로.

이 연구는 태아의 후각 상피를 식별하고 태아 연령이 진행됨에 따라 사골 점막 내 분포 변화를 평가하는 목적으로 설명하는 것을 목표로 합니다.

이 연구를 수행하기 위해 선택한 방법은 태아의 구조를 보존하기 위해 태아 사골(샘플 크기에 따라 몸 전체 또는 두부 말단만)의 표준 광학 현미경을 사용하는 조직학적 분석에 의존합니다. 현미경 분석은 면역조직화학 또는 면역형광 기술과 결합되어 관심 세포인 일차 후각 뉴런을 특성화합니다.

샘플 수집은 18~24개월에 걸쳐 연구 과정 전반에 걸쳐 태아 모집을 통해 전향적으로 이루어질 것입니다. 예상되는 최소 표본 크기는 20개 사례입니다. 샘플이 기여하지 않은 경우 또는 1차 및 2차 목적을 달성하기에 충분한 수의 샘플이 있는 경우 중간 분석이 계획됩니다.

샘플은 의료 또는 외과적 유도 유산 절차에서 얻은 태아 제품으로, 임신 기간은 최소 7주 무월경, 최대 14주 + 6일입니다.

샘플 모집은 낸시에 있는 대학 병원 산부인과의 Orthogeny Service 내에서 기존 서비스 프로토콜(의학적 또는 외과적 낙태)에 통합된 후 명확하고 공정한 정보를 제공하고 연구자가 환자로부터 서면 동의를 얻은 후 이루어질 예정입니다. 관련 의료팀에 진행 중인 연구에 대한 정보가 전달됩니다. 환자 치료에 대한 연구가 미치는 영향은 환자의 치료 과정과 수행되는 의료 절차를 방해하지 않도록 가능한 한 최소화되어야 합니다. 어떠한 치료 프로토콜도 이 프로토콜에 의해 또는 필요한 경우 현장 연구자에 의해 수정되거나 방해되어서는 안 됩니다.

프랑스 국립 보건 당국(HAS)에서 제공하고 프랑스 국립 산부인과 대학(CNGOF)에서 검증한 모범 사례 권장 사항의 2021년 업데이트에 따라 모든 낙태 절차에는 낙태 후 5일 이내에 사전 의료 상담이 포함됩니다. 여자의 부탁. 이 상담은 시술에 앞서 며칠 전부터 시술 자체에 대한 정보를 환자에게 제공하고 성공적인 시술에 필요한 임상 및 준임상적 의학적 전제조건을 다루는 것을 목표로 합니다. 이 기간 동안에는 의료 절차의 적절한 이행을 존중하기 위해 조사관의 개입이 없으며, 이는 간섭을 피하는 것이 바람직한 중요한 정보 기간이 필요합니다.

수행된 연구에 대한 환자 정보 및 서면 동의 획득은 환자가 산부인과 및 산부인과 외래환자실에 입원할 때 제공될 예정입니다. 의료팀과 준의료팀이 입원한 후 간단한 구두 인터뷰 형태로 진행되는 이 단계는 조사관의 책임입니다. 이는 법적 설립 지침을 준수하는 종이 문서로 문서화되어 2부로 제작되었으며, 한 부는 DRCI(임상 연구 및 혁신 부서) 조사관이 보관하고 두 번째 사본은 환자가 보관합니다.

인터뷰 후 조사자는 마지막 월경 날짜를 기록합니다. 이는 입원 환자로부터 수집된 유일한 개인 또는 의료 데이터입니다. Orthogeny Service의 의사가 확립한 의료 프로토콜에 따라 절차(의학적 또는 외과적)가 완료되면, 배출 또는 흡인 제품을 수집하고 아직 신선할 때 밀봉된 생체병리학적 수집 용기에 즉시 넣습니다.

각 샘플에는 COEF#N°라는 포함 번호와 마지막 월경 날짜로부터 계산된 임신 기간(주)이 표시되어 있습니다. 이러한 데이터는 병원 시설의 보안 컴퓨터에 있는 Excel® 스프레드시트에 체계적으로 색인화되어 있습니다. 샘플은 -80°C에서 급속 냉동하기 위해 조사관에 의해 낸시에 있는 대학 병원 산부인과의 태아 병리학 실험실로 즉시 운반됩니다. 양안 현미경으로 제품에 대한 예비 검사를 수행하여 관심 있는 태아 물질(전신, 온전한 안면 덩어리를 포함하여 전체 또는 단편화된 두부 말단)을 분리합니다.

각 샘플의 컨디셔닝은 표준화될 예정입니다. 10개 사례를 모집한 후, 냉동 샘플은 특정 Cryocut® 마이크로톰을 사용하여 냉동 절편 절차를 거칩니다. 이 단계를 통해 유리 슬라이드에 장착된 약 5 마이크로미터 두께의 직렬 섹션을 만들 수 있습니다. 표준 HES 염색을 사용한 초기 즉석 검사 단계를 통해 사골 블록을 정확하게 식별하고 이후 일련의 관상 섹션을 생성할 수 있습니다. 이 발달 단계에서는 골격 구조가 골화되지 않아 석회화 단계가 방지됩니다. 생성된 각 슬라이드에는 컴퓨터에 할당되고 실험실에서 사용하는 조직학적 분석 소프트웨어인 Ariane SX®에 의해 자동으로 제공되는 "연구 번호"가 표시됩니다. 이 숫자는 샘플 데이터(COEF#N° 및 임신 연령)와 관련하여 전자적으로 색인화되어 있습니다.

이렇게 생성된 일련의 슬라이드는 면역조직화학 또는 면역형광 기술로 처리됩니다.

계획된 면역조직학적 마커에는 시냅토파이신(SP), 신경특이적 에놀라제(NSE), 신경 세포 접착 분자(NCAM) 및 희소돌기아교세포 전사 인자(OLIG2)가 포함됩니다. 이러한 마커는 성숙 및 미성숙 일차 후각 뉴런을 식별하기 위해 문헌에 참조된 알려진 단일클론 항체입니다.

슬라이드에 라벨을 붙인 후 사진 스캐너를 통과하여 각 샘플에서 얻은 모든 이미지가 포함된 디지털 파일을 생성합니다. 각 파일의 제목은 각 샘플의 색인 번호(COEF#N°)에 따라 지정됩니다. 기록된 이미지 파일에는 해당 슬라이드 "연구" 번호가 표시됩니다.

본 연구의 순전히 기술적인 성격을 고려하여 기술통계를 계획했습니다.

분석 후 각 슬라이드 시리즈는 연구자의 책임 하에 태아 병리학 실험실에 4°C로 물리적으로 보관됩니다. 연구가 끝나면 이 슬라이드는 Lorraine Biological Resources Center의 전용 컬렉션 내에서 보존하기 위해 그룹화됩니다.