Sök efter luktceller i fetalt etmoidepitel (COEF)

Detta forskningsprojekt bygger på hypotesen att luktepitel finns i slemhinnan i de laterala etmoida massorna, liknande luktfissurerna i början av den fetala organogenesperioden, och gradvis försvinner före slutet av första trimestern i de laterala etmoida massorna. som de bildas.

Denna studie syftar till att vara beskrivande, med målet att identifiera detta fetala luktepitel och bedöma dess distributionsförändringar inom den etmoida slemhinnan när fostrets ålder fortskrider.

Den valda metoden för att genomföra denna studie är beroende av histologisk analys med användning av ett optiskt standardmikroskop av fetala etmoider (hela kroppar eller endast den cefaliska extremiteten beroende på provstorlek) för att bevara deras arkitektur. Mikroskopisk analys kommer att kopplas med immunhistokemi eller immunfluorescenstekniker för att karakterisera cellerna av intresse: primära luktneuroner.

Provinsamlingen kommer att vara prospektiv, med rekryteringen av foster spridd över studiens gång, som sträcker sig över 18 till 24 månader. Den förväntade minsta provstorleken är 20 fall. Mellanliggande analyser planeras i händelse av utebliven provtagning eller om det finns ett tillräckligt antal prover för att uppfylla de primära och sekundära målen.

Proverna är fosterprodukter erhållna från antingen medicinska eller kirurgiska inducerade abortingrepp, med en graviditetsålder på minst 7 veckor amenorré och upp till 14 veckor + 6 dagar.

Provrekrytering är planerad att ske inom ortogenitjänsten vid universitetssjukhusets moderskap i Nancy, integrerad i befintliga serviceprotokoll (medicinska eller kirurgiska aborter), och efter tydlig och rättvis information och inhämtat skriftligt informerat samtycke från patienterna från utredarna. De berörda vårdteamen informeras om den pågående forskningen. Forskningens inverkan på patientvården bör minimeras så mycket som möjligt för att undvika att patientens process och det medicinska ingrepp som genomförs störs. Inga behandlingsprotokoll bör modifieras eller störas av detta protokoll eller, om nödvändigt, av utredarna på plats.

I enlighet med 2021 års uppdatering av rekommendationerna för god praxis från den franska nationella myndigheten för hälsa (HAS) och validerade av den franska nationella kollegiet för gynekologi och obstetrik (CNGOF), inkluderar varje abortförfarande en tidigare medicinsk konsultation som hålls inom 5 dagar efter en kvinnas begäran. Denna konsultation föregår ingreppet med några dagar och syftar till att ge information om själva ingreppet till patienterna och ta itu med de kliniska och parakliniska medicinska förutsättningarna som är nödvändiga för ett framgångsrikt genomförande. Under denna tid finns det inget ingripande från utredarna för att respektera ett korrekt genomförande av den medicinska proceduren, vilket kräver en avgörande informationsperiod under vilken störningar är att föredra att undvika.

Patientinformation om den bedrivna forskningen och inhämtning av skriftligt samtycke planeras att ske vid patienternas inläggning på polikliniken för gynekologi och obstetrik. Denna fas, i form av en kort muntlig intervju efter intagningen av de medicinska och paramedicinska teamen, är utredarnas ansvar. Det är dokumenterat i ett pappersdokument som överensstämmer med juridiska etableringsdirektiv, producerat i två exemplar, med en kopia bevarad av utredarna för DRCI (Clinical Research and Innovation Department), och den andra behålls av patienten.

Datumet för den senaste menstruationen registreras av utredarna efter intervjun. Detta är den enda personliga eller medicinska information som samlas in från sjukhuspatienter. När proceduren är avslutad (medicinsk eller kirurgisk) enligt det medicinska protokoll som fastställts av utövarna inom ortogenitjänsten, samlas utdrivnings- eller aspirationsprodukterna upp och placeras omedelbart i en förseglad biopatologisk uppsamlingsbehållare medan de fortfarande är färska.

Varje prov är märkt med ett inklusionsnummer: COEF#N° och graviditetsåldern i veckor räknat från datumet för den senaste menstruationen. Dessa data indexeras systematiskt i ett Excel®-kalkylblad på en säker dator på sjukhuset. Provet transporteras omedelbart av utredarna till fosterpatologilaboratoriet vid universitetssjukhuset Maternity i Nancy för snabb frysning vid -80°C. En preliminär undersökning av produkterna under ett binokulärt mikroskop utförs för att isolera fostermaterial av intresse: hela kroppar, kompletta eller fragmenterade cefaliska extremiteter, inklusive den intakta ansiktsmassan.

Konditioneringen av varje prov är planerad att standardiseras. Efter rekryteringen av 10 fall utsätts frysta prover för en kryosnittsprocedur med en specifik Cryocut®-mikrotom. Detta steg tillåter skapandet av seriella sektioner med en tjocklek på cirka 5 mikrometer, monterade på glasskivor. En första extempore undersökningsfas med standard HES-färgning möjliggör exakt identifiering av etmoidblocket och därefter skapandet av en serie koronala sektioner. I detta utvecklingsstadium är skelettstrukturer inte förbenade, vilket undviker en avkalkningsfas. Varje producerat objektglas är märkt med ett "Research Number", datortilldelat och automatiskt ges av den histologiska analysmjukvaran som används av laboratoriet: Ariane SX®. Dessa siffror indexeras också elektroniskt i förhållande till provdata (COEF#N° och gestationsålder).

Serien av objektglas som sålunda skapas behandlas med immunhistokemi eller immunfluorescenstekniker.

De planerade immunohistologiska markörerna inkluderar: Synaptophysin (SP), Neurospecifikt Enolas (NSE), Neuronal Cell Adhesion Molecule (NCAM) och Oligodendrocyte Transcription Factor (OLIG2). Dessa markörer är kända monoklonala antikroppar som refereras till i litteraturen för att identifiera mogna och omogna primära luktneuroner.

Efter märkning av objektglasen passeras de genom en fotografisk skanner för att generera en digital fil som innehåller alla bilder som erhållits för varje prov. Varje fil har en titel enligt indexeringsnumret för varje prov: COEF#N°. De inspelade bildfilerna bär motsvarande bildnummer " Research ".

Med tanke på denna studies rent beskrivande karaktär planeras beskrivande statistik.

Efter analys förvaras varje serie av objektglas fysiskt vid 4°C i fosterpatologilaboratoriet under utredarnas ansvar. I slutet av studien kommer dessa objektglas att grupperas för bevarande i en dedikerad samling vid Lorraine Biological Resources Center.