Ricerca di cellule olfattive all'interno dell'epitelio etmoidale fetale (COEF)

Questo progetto di ricerca si basa sull'ipotesi che all'interno della mucosa delle masse etmoidali laterali sia presente un epitelio olfattivo, simile alle fessure olfattive all'inizio del periodo di organogenesi fetale, che scompare gradualmente prima della fine del primo trimestre nelle masse etmoidali laterali. man mano che si formano.

Questo studio vuole essere descrittivo, con l'obiettivo di identificare questo epitelio olfattivo fetale e valutare i suoi cambiamenti di distribuzione all'interno della mucosa etmoidale con l'avanzare dell'età fetale.

Il metodo scelto per condurre questo studio si basa sull'analisi istologica utilizzando un microscopio ottico standard degli etmoidi fetali (corpi interi o solo l'estremità cefalica a seconda delle dimensioni del campione) per preservarne l'architettura. L'analisi microscopica sarà abbinata a tecniche di immunoistochimica o immunofluorescenza per caratterizzare le cellule di interesse: i neuroni olfattivi primari.

La raccolta dei campioni sarà prospettica, con il reclutamento di feti distribuito nel corso dello studio, per un periodo compreso tra 18 e 24 mesi. La dimensione minima prevista del campione è di 20 casi. Sono previste analisi intermedie in caso di mancato conferimento di campioni o se il numero di campioni è sufficiente per soddisfare gli obiettivi primari e secondari.

I campioni sono prodotti fetali ottenuti da procedure di aborto indotto medico o chirurgico, con un'età gestazionale di minimo 7 settimane di amenorrea e fino a 14 settimane + 6 giorni.

È previsto che il reclutamento dei campioni avvenga all'interno del Servizio di Ortogenesi della Maternità dell'Ospedale Universitario di Nancy, integrato nei protocolli di servizio esistenti (aborti medici o chirurgici), e dopo informazioni chiare ed eque e dopo aver ottenuto il consenso informato scritto delle pazienti da parte degli investigatori. Le équipe sanitarie competenti sono informate della ricerca in corso. L'impatto della ricerca sulla cura del paziente dovrebbe essere minimizzato il più possibile per evitare di interrompere il processo del paziente e la procedura medica eseguita. Nessun protocollo di trattamento deve essere modificato o disturbato dal presente protocollo o, se necessario, dagli investigatori in loco.

In conformità con l'aggiornamento 2021 delle raccomandazioni di buona pratica fornite dall'Autorità nazionale francese per la salute (HAS) e convalidate dal Collegio nazionale francese di ginecologia e ostetricia (CNGOF), ogni procedura di aborto comprende una previa consultazione medica tenuta entro 5 giorni successivi la richiesta di una donna. Questa consultazione precede la procedura di alcuni giorni e ha lo scopo di fornire informazioni sulla procedura stessa ai pazienti e affrontare i prerequisiti medici clinici e paraclinici necessari per la sua riuscita esecuzione. Durante questo periodo non vi è alcun intervento da parte degli investigatori per rispettare la corretta esecuzione della procedura medica, che richiede un periodo informativo cruciale durante il quale è preferibile evitare interferenze.

Si prevede che l'informazione dei pazienti sulla ricerca condotta e l'ottenimento del consenso scritto avvenga al momento del ricovero dei pazienti presso l'ambulatorio di Ginecologia e Ostetricia. Questa fase, sotto forma di un breve colloquio orale successivo al ricovero da parte delle équipe mediche e paramediche, è di competenza degli investigatori. Viene documentato in un documento cartaceo conforme alle direttive dell'istituto legale, prodotto in duplice copia, una copia conservata dagli investigatori per il DRCI (Dipartimento Ricerca e Innovazione Clinica), e la seconda conservata dal paziente.

La data dell'ultimo periodo mestruale viene registrata dagli investigatori dopo l'intervista. Questi sono gli unici dati personali o medici raccolti dai pazienti ospedalizzati. Una volta completata la procedura (medica o chirurgica) secondo il protocollo medico stabilito dai medici del Servizio di Ortogenesi, i prodotti dell'espulsione o dell'aspirazione vengono raccolti e immediatamente immessi ancora freschi in un contenitore di raccolta biopatologica sigillato.

Ogni campione è contrassegnato da un numero di inclusione: COEF#N° e dall'età gestazionale in settimane calcolata a partire dalla data dell'ultima mestruazione. Questi dati vengono sistematicamente indicizzati in un foglio di calcolo Excel® su un computer protetto nella struttura ospedaliera. Il campione viene prontamente trasportato dagli investigatori al Laboratorio di Patologia Fetale della Maternità dell'Ospedale Universitario di Nancy per il congelamento rapido a -80°C. Viene eseguito un esame preliminare dei prodotti al microscopio binoculare per isolare il materiale fetale di interesse: corpi interi, estremità cefaliche complete o frammentate, inclusa la massa facciale intatta.

Si prevede che il condizionamento di ciascun campione sia standardizzato. Dopo il reclutamento di 10 casi, i campioni congelati vengono sottoposti a una procedura di criosezione utilizzando uno specifico microtomo Cryocut®. Questo passaggio consente la creazione di sezioni seriali con uno spessore di circa 5 micrometri, montate su vetrini. Una prima fase di esame estemporaneo con colorazione standard HES consente la precisa identificazione del blocco etmoidale e successivamente la realizzazione di una serie di sezioni coronali. In questa fase di sviluppo le strutture scheletriche non sono ossificate, evitando una fase di decalcificazione. Ogni vetrino prodotto è contrassegnato da un "Numero di ricerca", assegnato dal computer e fornito automaticamente dal software di analisi istologica utilizzato dal Laboratorio: Ariane SX®. Tali numeri vengono anche indicizzati elettronicamente in relazione ai dati del campione (COEF#N° ed età gestazionale).

La serie di vetrini così realizzati vengono trattati con tecniche di immunoistochimica o immunofluorescenza.

I marcatori immunoistologici previsti includono: sinaptofisina (SP), enolasi neurospecifica (NSE), molecola di adesione delle cellule neuronali (NCAM) e fattore di trascrizione degli oligodendrociti (OLIG2). Questi marcatori sono noti anticorpi monoclonali citati in letteratura per identificare i neuroni olfattivi primari maturi e immaturi.

Dopo aver etichettato i vetrini, questi vengono passati attraverso uno scanner fotografico per generare un file digitale contenente tutte le immagini ottenute per ciascun campione. Ogni file è intitolato in base al numero di indicizzazione di ciascun campione: COEF#N°. I file di immagine registrati portano il numero "Ricerca" della diapositiva corrispondente.

Data la natura puramente descrittiva di questo studio, sono previste statistiche descrittive.

Dopo l'analisi, ciascuna serie di vetrini viene conservata fisicamente a 4°C nel Laboratorio di Patologia Fetale sotto la responsabilità dei ricercatori. Al termine dello studio, questi vetrini saranno raggruppati per la conservazione all'interno di una collezione dedicata presso il Centro Risorse Biologiche della Lorena.