Szukaj komórek węchowych w nabłonku sitowym płodu (COEF)

Niniejszy projekt badawczy opiera się na hipotezie, że nabłonek węchowy występuje w obrębie błony śluzowej bocznych mas sitowych, podobnie jak szczeliny węchowe na początku okresu organogenezy płodu, stopniowo zanikając przed końcem pierwszego trymestru w bocznych masach sitowych jak się tworzą.

Badanie to ma charakter opisowy, a jego celem jest identyfikacja nabłonka węchowego płodu i ocena jego zmian w rozmieszczeniu w błonie śluzowej sitowej wraz z wiekiem płodu.

Wybrana metoda przeprowadzenia tego badania opiera się na analizie histologicznej przy użyciu standardowego mikroskopu optycznego sitów płodowych (całych ciał lub tylko końcówki głowowej, w zależności od wielkości próbki) w celu zachowania ich architektury. Analiza mikroskopowa zostanie połączona z technikami immunohistochemicznymi lub immunofluorescencyjnymi, aby scharakteryzować interesujące komórki: pierwotne neurony węchowe.

Pobieranie próbek będzie miało charakter prospektywny, a rekrutacja płodów będzie rozłożona w trakcie badania, trwającego od 18 do 24 miesięcy. Przewidywana minimalna wielkość próby wynosi 20 przypadków. Analizy pośrednie planuje się w przypadku braku próbek lub w przypadku, gdy liczba próbek jest wystarczająca do osiągnięcia celów głównych i drugorzędnych.

Próbkami są produkty płodowe uzyskane w wyniku aborcji medycznej lub chirurgicznej, których wiek ciążowy wynosi co najmniej 7 tygodni w przypadku braku miesiączki i do 14 tygodni + 6 dni.

Planuje się, że rekrutacja próbek odbędzie się w ramach Orthogeny Service Szpitala Uniwersyteckiego w Nancy, po zintegrowaniu z istniejącymi protokołami usług (aborcje medyczne lub chirurgiczne), po jasnych i uczciwych informacjach oraz uzyskaniu pisemnej świadomej zgody pacjentów przez badaczy. Odpowiednie zespoły medyczne są informowane o trwających badaniach. Należy w jak największym stopniu minimalizować wpływ badań na opiekę nad pacjentem, aby nie zakłócać procesu leczenia pacjenta i przeprowadzanej procedury medycznej. Żaden protokół leczenia nie powinien być modyfikowany ani zakłócany przez niniejszy protokół lub, jeśli to konieczne, przez inspektorów na miejscu.

Zgodnie z aktualizacją Zaleceń dobrych praktyk z 2021 r. dostarczonych przez francuski Krajowy Urząd ds. Zdrowia (HAS) i zatwierdzonych przez Francuskie Krajowe Kolegium Ginekologii i Położnictwa (CNGOF), każdy zabieg aborcji obejmuje wcześniejszą konsultację lekarską przeprowadzoną w ciągu 5 dni po zabiegu. prośba kobiety. Konsultacja ta poprzedza zabieg o kilka dni i ma na celu przekazanie pacjentowi informacji na temat samego zabiegu oraz zapoznanie się z klinicznymi i paraklinicznymi przesłankami medycznymi niezbędnymi do jego pomyślnego przeprowadzenia. W tym czasie badacze nie podejmują żadnych działań mających na celu przestrzeganie prawidłowego wdrożenia procedury medycznej, co wymaga kluczowego okresu informacyjnego, podczas którego lepiej jest unikać zakłóceń.

Planuje się, że informacja dla pacjenta o przeprowadzonych badaniach i uzyskaniu pisemnej zgody nastąpi w momencie przyjęcia pacjentki do Ambulatoryjnego Oddziału Ginekologii i Położnictwa. Za tę fazę, polegającą na krótkiej rozmowie ustnej po przyjęciu przez zespół medyczny i paramedyczny, odpowiadają osoby przeprowadzające badanie. Jest to udokumentowane w dokumencie papierowym zgodnym z wytycznymi instytucji prawnych, sporządzonym w dwóch egzemplarzach, przy czym jeden egzemplarz zostaje zatrzymany przez badaczy dla DRCI (Departament Badań Klinicznych i Innowacji), a drugi dla pacjenta.

Po przeprowadzeniu wywiadu badacze rejestrują datę ostatniej miesiączki. Są to jedyne dane osobowe lub medyczne zebrane od hospitalizowanych pacjentów. Po zakończeniu procedury (medycznej lub chirurgicznej) zgodnie z protokołem medycznym ustalonym przez praktyków Służby Orthogeny, produkty wydalenia lub aspiracji są zbierane i natychmiast umieszczane w szczelnym pojemniku na odpady biopatologiczne, gdy są jeszcze świeże.

Każda próbka jest oznaczona numerem włączenia: COEF#N° oraz wiekiem ciążowym w tygodniach liczonym od daty ostatniej miesiączki. Dane te są na bieżąco indeksowane w arkuszu kalkulacyjnym Excel® na bezpiecznym komputerze w placówce szpitalnej. Próbka jest niezwłocznie transportowana przez badaczy do Laboratorium Patologii Płodu Uniwersyteckiego Szpitala Położniczego w Nancy w celu szybkiego zamrożenia w temperaturze -80°C. Wstępne badanie produktów pod mikroskopem obuocznym przeprowadza się w celu wyizolowania materiału płodowego będącego przedmiotem zainteresowania: całych ciał, całych lub fragmentarycznych kończyn głowowych, w tym nienaruszonej masy twarzowej.

Planuje się, że kondycjonowanie każdej próbki będzie standaryzowane. Po rekrutacji 10 przypadków zamrożone próbki poddaje się procedurze kriosekcji przy użyciu specjalnego mikrotomu Cryocut®. Etap ten pozwala na wykonanie seryjnych przekrojów o grubości około 5 mikrometrów, mocowanych na szkiełkach. Wstępna, doraźna faza badania ze standardowym barwieniem HES umożliwia precyzyjną identyfikację bloku sitowego, a następnie wykonanie serii przekrojów koronowych. Na tym etapie rozwoju struktury szkieletowe nie ulegają skostnieniu, co pozwala uniknąć fazy odwapnienia. Każdy wyprodukowany preparat jest oznaczony „Numerem badawczym” przydzielanym komputerowo i automatycznie nadawanym przez oprogramowanie do analizy histologicznej używane w Laboratorium: Ariane SX®. Liczby te są również indeksowane elektronicznie w odniesieniu do danych próbki (COEF#N° i wiek ciążowy).

Powstałe w ten sposób serie preparatów poddaje się obróbce technikami immunohistochemicznymi lub immunofluorescencyjnymi.

Planowane markery immunohistologiczne obejmują: synaptofizynę (SP), enolazę neurospecyficzną (NSE), cząsteczkę adhezji komórek neuronowych (NCAM) i czynnik transkrypcji oligodendrocytów (OLIG2). Markerami tymi są znane przeciwciała monoklonalne, o których mowa w literaturze, służące do identyfikacji dojrzałych i niedojrzałych pierwotnych neuronów węchowych.

Po oznakowaniu szkiełka są przepuszczane przez skaner fotograficzny w celu wygenerowania pliku cyfrowego zawierającego wszystkie obrazy uzyskane dla każdej próbki. Każdy plik ma tytuł zgodny z numerem indeksowym każdej próbki: COEF#N°. Nagrane pliki obrazów mają odpowiedni numer slajdu „Badania”.

Ze względu na czysto opisowy charakter niniejszego badania zaplanowano statystyki opisowe.

Po analizie każdą serię preparatów fizycznie przechowuje się w temperaturze 4°C w Laboratorium Patologii Płodu, za które odpowiadają badacze. Pod koniec badania szkiełka te zostaną zgrupowane w celu konserwacji w specjalnej kolekcji w Centrum Zasobów Biologicznych Lotaryngii.