Søk etter olfaktoriske celler i fosterets etmoidepitel (COEF)

Dette forskningsprosjektet er basert på hypotesen om at lukteepitel er tilstede i slimhinnen i de laterale etmoide massene, lik luktefissurene i begynnelsen av den føtale organogeneseperioden, og gradvis forsvinner før slutten av første trimester i de laterale etmoide massene. som de dannes.

Denne studien tar sikte på å være beskrivende, med mål om å identifisere dette fosterets luktepitelet og vurdere dets distribusjonsendringer i den etmoideale slimhinnen etter hvert som fosterets alder utvikler seg.

Den valgte metoden for å gjennomføre denne studien er avhengig av histologisk analyse ved bruk av et standard optisk mikroskop av føtale etmoider (hele kropper eller bare den cefaliske ekstremiteten avhengig av prøvestørrelsen) for å bevare deres arkitektur. Mikroskopisk analyse vil bli kombinert med immunhistokjemi eller immunfluorescensteknikker for å karakterisere cellene av interesse: primære olfaktoriske nevroner.

Prøveinnsamlingen vil være prospektiv, med rekruttering av fostre spredt i løpet av studien, som strekker seg over 18 til 24 måneder. Den forventede minste prøvestørrelsen er 20 tilfeller. Det planlegges mellomliggende analyser i tilfelle ikke-bidrag av prøver eller hvis det er tilstrekkelig antall prøver for å oppfylle primære og sekundære mål.

Prøvene er føtale produkter hentet fra enten medisinske eller kirurgiske induserte abortprosedyrer, med en svangerskapsalder på minimum 7 uker amenoré og opptil 14 uker + 6 dager.

Rekruttering av prøver er planlagt å finne sted innenfor Orthogeny Service of the University Hospital Maternity i Nancy, integrert i eksisterende tjenesteprotokoller (medisinske eller kirurgiske aborter), og etter klar og rettferdig informasjon og innhenting av skriftlig informert samtykke fra pasientene fra etterforskerne. De aktuelle helseteamene blir informert om den pågående forskningen. Effekten av forskningen på pasientbehandlingen bør minimeres så mye som mulig for å unngå å forstyrre pasientens prosess og den medisinske prosedyren som utføres. Ingen behandlingsprotokoller skal modifiseres eller forstyrres av denne protokollen eller, om nødvendig, av etterforskerne på stedet.

I samsvar med 2021-oppdateringen av anbefalingene for god praksis gitt av den franske nasjonale myndigheten for helse (HAS) og validert av den franske nasjonale høgskolen for gynekologi og obstetrikk (CNGOF), inkluderer hver abortprosedyre en forutgående medisinsk konsultasjon innen 5 dager etter en kvinnes forespørsel. Denne konsultasjonen går noen dager før prosedyren og har som mål å gi informasjon om selve prosedyren til pasientene og adressere de kliniske og parakliniske medisinske forutsetningene som er nødvendige for vellykket gjennomføring. I løpet av denne tiden er det ingen intervensjon fra etterforskerne for å respektere riktig gjennomføring av den medisinske prosedyren, som krever en viktig informasjonsperiode der interferens er å foretrekke å unngå.

Pasientinformasjon om utført forskning og innhenting av skriftlig samtykke er planlagt å skje ved pasientens innleggelse til poliklinisk enhet for gynekologi og obstetrikk. Denne fasen, i form av et kort muntlig intervju etter innleggelsen av det medisinske og paramedisinske teamet, er etterforskernes ansvar. Det er dokumentert i et papirdokument som samsvarer med juridiske etableringsdirektiver, produsert i duplikat, med ett eksemplar beholdt av etterforskerne for DRCI (Clinical Research and Innovation Department), og det andre beholdt av pasienten.

Datoen for siste menstruasjon registreres av etterforskerne etter intervjuet. Dette er den eneste personlige eller medisinske data som samles inn fra sykehusinnlagte pasienter. Når prosedyren er fullført (medisinsk eller kirurgisk) i henhold til den medisinske protokollen som er etablert av utøverne i Orthogeny Service, samles utdrivings- eller aspirasjonsproduktene opp og plasseres umiddelbart i en forseglet biopatologisk oppsamlingsbeholder mens de fortsatt er ferske.

Hver prøve er merket med et inklusjonsnummer: COEF#N° og svangerskapsalderen i uker regnet fra datoen for siste menstruasjon. Disse dataene indekseres systematisk i et Excel®-regneark på en sikker datamaskin i sykehuset. Prøven transporteres umiddelbart av etterforskerne til føtalpatologilaboratoriet ved universitetssykehuset Maternity i Nancy for rask nedfrysing ved -80°C. En foreløpig undersøkelse av produktene under et kikkertmikroskop utføres for å isolere fostermateriale av interesse: hele kropper, komplette eller fragmenterte cephalic ekstremiteter, inkludert den intakte ansiktsmassen.

Konditioneringen av hver prøve er planlagt standardisert. Etter rekruttering av 10 tilfeller, blir frosne prøver utsatt for en kryoseksjonsprosedyre ved bruk av en spesifikk Cryocut®-mikrotom. Dette trinnet gjør det mulig å lage serielle seksjoner med en tykkelse på omtrent 5 mikrometer, montert på glassbilder. En innledende ekstemporeundersøkelsesfase med standard HES-farging muliggjør nøyaktig identifikasjon av etmoidblokken og deretter opprettelsen av en serie med koronale seksjoner. På dette stadiet av utviklingen forbenes ikke skjelettstrukturer, noe som unngår en avkalkingsfase. Hvert produsert lysbilde er merket med et "Research Number", datamaskintilordnet og automatisk gitt av den histologiske analyseprogramvaren som brukes av laboratoriet: Ariane SX®. Disse tallene er også indeksert elektronisk i forhold til prøvedataene (COEF#N° og svangerskapsalder).

Serien med lysbilder som er opprettet på denne måten, behandles med immunhistokjemi eller immunfluorescensteknikker.

De planlagte immunohistologiske markørene inkluderer: Synaptophysin (SP), Neurospecific Enolase (NSE), Neuronal Cell Adhesion Molecule (NCAM) og Oligodendrocyte Transcription Factor (OLIG2). Disse markørene er kjente monoklonale antistoffer referert til i litteraturen for å identifisere modne og umodne primære luktneuroner.

Etter merking av lysbildene føres de gjennom en fotografisk skanner for å generere en digital fil som inneholder alle bildene som er oppnådd for hver prøve. Hver fil har en tittel i henhold til indekseringsnummeret til hver prøve: COEF#N°. De innspilte bildefilene har det tilsvarende lysbildet " Research "-nummer.

Gitt den rent beskrivende karakteren til denne studien, er det planlagt beskrivende statistikk.

Etter analyse lagres hver serie med objektglass fysisk ved 4 °C i føtalpatologilaboratoriet under ansvar av etterforskerne. På slutten av studien vil disse lysbildene bli gruppert for bevaring i en dedikert samling ved Lorraine Biological Resources Center.