Suche nach Riechzellen im fetalen Siebbeinepithel (COEF)

Dieses Forschungsprojekt basiert auf der Hypothese, dass Riechepithel in der Schleimhaut der seitlichen Siebbeinmassen vorhanden ist, ähnlich den Riechspalten zu Beginn der fötalen Organogeneseperiode, das vor dem Ende des ersten Trimesters in den seitlichen Siebbeinmassen allmählich verschwindet wie sie sich bilden.

Ziel dieser Studie ist es, dieses fötale Riechepithel zu identifizieren und seine Verteilungsänderungen in der Siebbeinschleimhaut mit fortschreitendem Alter des Fötus zu beurteilen.

Die gewählte Methode zur Durchführung dieser Studie basiert auf einer histologischen Analyse unter Verwendung eines Standard-Lichtmikroskops fetaler Siebbeine (ganze Körper oder nur die Schädelextremität, abhängig von der Probengröße), um deren Architektur zu bewahren. Die mikroskopische Analyse wird mit Techniken der Immunhistochemie oder Immunfluoreszenz gekoppelt, um die interessierenden Zellen zu charakterisieren: primäre Riechneuronen.

Die Probenentnahme erfolgt prospektiv, wobei die Rekrutierung von Föten über den Studienverlauf verteilt wird und sich über 18 bis 24 Monate erstreckt. Die voraussichtliche Mindeststichprobengröße beträgt 20 Fälle. Zwischenanalysen sind geplant für den Fall, dass keine Proben bereitgestellt werden oder wenn eine ausreichende Anzahl von Proben vorhanden ist, um die primären und sekundären Ziele zu erreichen.

Bei den Proben handelt es sich um fötale Produkte, die entweder aus medizinisch oder chirurgisch induzierten Abtreibungsverfahren gewonnen wurden, mit einem Gestationsalter von mindestens 7 Wochen Amenorrhoe und bis zu 14 Wochen + 6 Tagen.

Die Probenrekrutierung soll innerhalb des Orthogenie-Dienstes des Universitätsklinikums für Entbindungskliniken in Nancy erfolgen, integriert in bestehende Dienstprotokolle (medizinische oder chirurgische Abtreibungen) und nach klarer und fairer Information und Einholung einer schriftlichen Einverständniserklärung der Patienten durch die Prüfer. Die zuständigen Gesundheitsteams werden über die laufende Forschung informiert. Die Auswirkungen der Forschung auf die Patientenversorgung sollten so gering wie möglich gehalten werden, um den Prozess des Patienten und den durchgeführten medizinischen Eingriff nicht zu stören. Durch dieses Protokoll oder, falls erforderlich, durch die Prüfärzte vor Ort dürfen keine Behandlungsprotokolle verändert oder gestört werden.

Gemäß der 2021 von der französischen Nationalen Gesundheitsbehörde (HAS) bereitgestellten und von der französischen Nationalen Hochschule für Gynäkologie und Geburtshilfe (CNGOF) validierten Aktualisierung der Empfehlungen für bewährte Verfahren aus dem Jahr 2021 umfasst jeder Abtreibungsvorgang eine vorherige ärztliche Konsultation, die innerhalb von 5 Tagen danach durchgeführt wird die Bitte einer Frau. Dieses Beratungsgespräch geht dem Eingriff einige Tage voraus und hat zum Ziel, den Patienten über den Eingriff selbst zu informieren und die für eine erfolgreiche Durchführung notwendigen klinischen und paraklinischen medizinischen Voraussetzungen zu klären. Während dieser Zeit greifen die Prüfer nicht ein, um die ordnungsgemäße Durchführung des medizinischen Verfahrens zu gewährleisten, was eine entscheidende Informationsphase erfordert, in der Eingriffe möglichst vermieden werden sollten.

Patienteninformationen über die durchgeführten Untersuchungen und die Einholung einer schriftlichen Einwilligung sollen bei der Aufnahme der Patienten in die Ambulanz für Gynäkologie und Geburtshilfe erfolgen. Diese Phase in Form eines kurzen mündlichen Interviews nach ihrer Aufnahme durch das medizinische und paramedizinische Team liegt in der Verantwortung der Ermittler. Es wird in einem Papierdokument dokumentiert, das den gesetzlichen Einrichtungsrichtlinien entspricht und in zweifacher Ausfertigung erstellt wird, wobei eine Kopie von den Prüfern für die DRCI (Abteilung für klinische Forschung und Innovation) und die zweite vom Patienten aufbewahrt wird.

Das Datum der letzten Menstruation wird von den Untersuchern nach dem Interview erfasst. Dies sind die einzigen personenbezogenen oder medizinischen Daten, die von Krankenhauspatienten erhoben werden. Sobald der Eingriff (medizinisch oder chirurgisch) gemäß dem von den Ärzten des Orthogenie-Dienstes festgelegten medizinischen Protokoll abgeschlossen ist, werden die Austreibungs- oder Aspirationsprodukte gesammelt und sofort in einen versiegelten biopathologischen Sammelbehälter gegeben, solange sie noch frisch sind.

Jede Probe ist mit einer Einschlussnummer gekennzeichnet: COEF#N° und dem Gestationsalter in Wochen, berechnet ab dem Datum der letzten Menstruationsperiode. Diese Daten werden systematisch in einer Excel®-Tabelle auf einem sicheren Computer in der Krankenhauseinrichtung indexiert. Die Probe wird von den Forschern umgehend zum Labor für fetale Pathologie des Universitätsklinikums für Geburtshilfe in Nancy transportiert, wo sie bei -80 °C schnell eingefroren wird. Eine vorläufige Untersuchung der Produkte unter einem Binokularmikroskop wird durchgeführt, um das interessierende fetale Material zu isolieren: ganze Körper, vollständige oder fragmentierte Schädelextremitäten, einschließlich der intakten Gesichtsmasse.

Die Konditionierung jeder Probe soll standardisiert werden. Nach der Rekrutierung von 10 Fällen werden gefrorene Proben einem Kryoschnittverfahren mit einem speziellen Cryocut®-Mikrotom unterzogen. Dieser Schritt ermöglicht die Erstellung von Serienschnitten mit einer Dicke von ca. 5 Mikrometern, montiert auf Glasobjektträgern. Eine erste Phase der spontanen Untersuchung mit Standard-HES-Färbung ermöglicht die genaue Identifizierung des Siebbeinblocks und anschließend die Erstellung einer Reihe koronaler Schnitte. In diesem Entwicklungsstadium sind die Skelettstrukturen nicht verknöchert, wodurch eine Entkalkungsphase vermieden wird. Jeder produzierte Objektträger ist mit einer „Forschungsnummer“ gekennzeichnet, die vom Computer zugewiesen und automatisch von der vom Labor verwendeten histologischen Analysesoftware Ariane SX® vergeben wird. Diese Zahlen werden auch elektronisch in Bezug auf die Probendaten (COEF#N° und Gestationsalter) indiziert.

Die so erstellten Objektträgerserien werden mit immunhistochemischen oder immunfluoreszierenden Techniken behandelt.

Zu den geplanten immunhistologischen Markern gehören: Synaptophysin (SP), neurospezifische Enolase (NSE), neuronales Zelladhäsionsmolekül (NCAM) und Oligodendrozyten-Transkriptionsfaktor (OLIG2). Bei diesen Markern handelt es sich um bekannte monoklonale Antikörper, auf die in der Literatur zur Identifizierung reifer und unreifer primärer Riechneuronen verwiesen wird.

Nach der Beschriftung der Objektträger werden diese durch einen Fotoscanner geführt, um eine digitale Datei zu erstellen, die alle für jede Probe erhaltenen Bilder enthält. Jede Datei trägt den Titel entsprechend der Indexnummer jeder Probe: COEF#N°. Die aufgenommenen Bilddateien tragen die entsprechende Foliennummer „Recherche“.

Aufgrund des rein deskriptiven Charakters dieser Studie sind deskriptive Statistiken geplant.

Nach der Analyse wird jede Objektträgerserie unter der Verantwortung der Forscher physisch bei 4 °C im Labor für fetale Pathologie gelagert. Am Ende der Studie werden diese Objektträger zur Aufbewahrung in einer speziellen Sammlung im Lorraine Biological Resources Center zusammengefasst.