Recherche de cellules olfactives dans l'épithélium ethmoïde fœtal (COEF)

Ce projet de recherche repose sur l'hypothèse que l'épithélium olfactif est présent au sein de la muqueuse des masses ethmoïdes latérales, à l'image des fissures olfactives au début de la période d'organogenèse fœtale, disparaissant progressivement avant la fin du premier trimestre dans les masses ethmoïdes latérales. à mesure qu'ils se forment.

Cette étude se veut descriptive, avec pour objectif d'identifier cet épithélium olfactif fœtal et d'évaluer ses modifications de répartition au sein de la muqueuse ethmoïdale au fur et à mesure de l'âge fœtal.

La méthode choisie pour mener cette étude repose sur l'analyse histologique au microscope optique standard des ethmoïdes fœtaux (corps entiers ou uniquement l'extrémité céphalique selon la taille de l'échantillon) afin de préserver leur architecture. L'analyse microscopique sera couplée à des techniques d'immunohistochimie ou d'immunofluorescence pour caractériser les cellules d'intérêt : les neurones olfactifs primaires.

Le prélèvement d'échantillons sera prospectif, avec le recrutement des fœtus étalé au cours de l'étude, s'étalant sur 18 à 24 mois. La taille minimale prévue de l'échantillon est de 20 cas. Des analyses intermédiaires sont prévues en cas de non apport d'échantillons ou si le nombre d'échantillons est suffisant pour répondre aux objectifs primaires et secondaires.

Les échantillons sont des produits fœtaux obtenus à partir de procédures d'avortement provoquées médicales ou chirurgicales, avec un âge gestationnel d'au moins 7 semaines d'aménorrhée et jusqu'à 14 semaines + 6 jours.

Le recrutement des échantillons est prévu au sein du Service d'Orthogénie de la Maternité du CHU de Nancy, intégré aux protocoles de service existants (avortements médicamenteux ou chirurgicaux), et après une information claire et équitable et l'obtention du consentement éclairé écrit des patientes par les enquêteurs. Les équipes soignantes concernées sont informées des recherches en cours. L'impact de la recherche sur les soins aux patients doit être minimisé autant que possible pour éviter de perturber le processus du patient et l'intervention médicale en cours. Aucun protocole de traitement ne doit être modifié ou perturbé par ce protocole ou, si nécessaire, par les enquêteurs sur place.

Conformément à l'actualisation 2021 des Recommandations de bonnes pratiques fournies par la Haute autorité de santé (HAS) et validées par le Collège national de gynécologie et d'obstétrique (CNGOF), toute procédure d'IVG comporte une consultation médicale préalable dans les 5 jours qui suivent. la demande d'une femme. Cette consultation précède l'intervention de quelques jours et vise à informer les patients sur l'intervention elle-même et à aborder les prérequis médicaux cliniques et paracliniques nécessaires à sa bonne exécution. Pendant ce temps, il n'y a aucune intervention des enquêteurs pour respecter le bon déroulement de l'acte médical, ce qui nécessite un délai d'information crucial pendant lequel il est préférable d'éviter toute ingérence.

L'information des patients sur les recherches menées et l'obtention du consentement écrit devraient avoir lieu lors de l'admission des patients à l'unité ambulatoire de gynécologie et d'obstétrique. Cette phase, sous forme d'un bref entretien oral suite à leur admission par les équipes médicales et paramédicales, relève de la responsabilité des enquêteurs. Elle est consignée dans un document papier conforme aux directives de l'établissement légal, établi en double exemplaire, l'un étant conservé par les enquêteurs de la DRCI (Direction de la Recherche Clinique et de l'Innovation) et le second conservé par le patient.

La date des dernières règles est enregistrée par les enquêteurs après l'entretien. Ce sont les seules données personnelles ou médicales collectées auprès des patients hospitalisés. Une fois l'intervention terminée (médicale ou chirurgicale) selon le protocole médical établi par les praticiens du Service d'Orthogénie, les produits d'expulsion ou d'aspiration sont collectés et immédiatement placés dans un récipient de recueil biopathologique hermétique encore frais.

Chaque échantillon est marqué d'un numéro d'inclusion : COEF#N° et de l'âge gestationnel en semaines calculé à partir de la date des dernières règles. Ces données sont systématiquement indexées dans un tableur Excel® sur un ordinateur sécurisé de l'établissement hospitalier. L'échantillon est rapidement transporté par les enquêteurs au Laboratoire de Pathologie Fœtale de la Maternité du CHU de Nancy pour une congélation rapide à -80°C. Un examen préliminaire des produits au microscope binoculaire est réalisé pour isoler le matériel fœtal d'intérêt : corps entiers, extrémités céphaliques complètes ou fragmentées, y compris la masse faciale intacte.

Il est prévu que le conditionnement de chaque échantillon soit standardisé. Après le recrutement de 10 cas, les échantillons congelés sont soumis à une procédure de cryosection à l'aide d'un microtome Cryocut® spécifique. Cette étape permet la création de coupes en série d'une épaisseur d'environ 5 micromètres, montées sur des lames de verre. Une première phase d'examen extemporané avec coloration HES standard permet l'identification précise du bloc ethmoïdal puis la réalisation d'une série de coupes coronales. A ce stade de développement, les structures squelettiques ne sont pas ossifiées, évitant ainsi une phase de décalcification. Chaque lame réalisée est marquée d'un « Numéro de Recherche », attribué informatiquement et automatiquement délivré par le logiciel d'analyse histologique utilisé par le Laboratoire : Ariane SX®. Ces numéros sont également indexés électroniquement par rapport aux données de l'échantillon (COEF#N° et âge gestationnel).

Les séries de lames ainsi créées sont traitées par des techniques d'immunohistochimie ou d'immunofluorescence.

Les marqueurs immunohistologiques prévus comprennent : la synaptophysine (SP), l'énolase neurospécifique (NSE), la molécule d'adhésion des cellules neuronales (NCAM) et le facteur de transcription des oligodendrocytes (OLIG2). Ces marqueurs sont des anticorps monoclonaux connus référencés dans la littérature pour identifier les neurones olfactifs primaires matures et immatures.

Après avoir étiqueté les lames, elles passent dans un scanner photographique pour générer un fichier numérique contenant toutes les images obtenues pour chaque échantillon. Chaque fichier est intitulé selon le numéro d'indexation de chaque échantillon : COEF#N°. Les fichiers images enregistrés portent le numéro de diapositive « Recherche » correspondant.

Compte tenu du caractère purement descriptif de cette étude, des statistiques descriptives sont prévues.

Après analyse, chaque série de lames est physiquement conservée à 4°C au Laboratoire de Pathologie Fœtale sous la responsabilité des enquêteurs. A l'issue de l'étude, ces lames seront regroupées pour être conservées au sein d'une collection dédiée au Centre de Ressources Biologiques de Lorraine.