Etsi hajusoluja sikiön etmoidiepiteelista (COEF)

Tämä tutkimusprojekti perustuu hypoteesiin, jonka mukaan hajuepiteeli on läsnä sivuttaisten etmoidimassojen limakalvoissa, samanlainen kuin hajuhalkeamia sikiön organogeneesivaiheen alussa, ja häviää vähitellen ennen ensimmäisen raskauskolmanneksen loppua lateraalisissa etmoidimassoissa. kun ne muodostuvat.

Tämän tutkimuksen tavoitteena on olla kuvaava, ja tavoitteena on tunnistaa tämä sikiön hajuepiteeli ja arvioida sen jakautumismuutoksia etmoidaalisen limakalvon sisällä sikiön iän edetessä.

Valittu menetelmä tämän tutkimuksen suorittamiseksi perustuu histologiseen analyysiin, jossa käytetään tavallista optista mikroskooppia sikiön etmoideista (koko kehot tai vain pään raajat näytteen koosta riippuen) niiden arkkitehtuurin säilyttämiseksi. Mikroskooppinen analyysi yhdistetään immunohistokemiaan tai immunofluoresenssitekniikoihin kiinnostuksen kohteena olevien solujen: primaaristen hajuneuronien karakterisoimiseksi.

Näytteenotto on tulevaisuutta, ja sikiöiden rekrytointi jakautuu tutkimuksen aikana 18-24 kuukauden ajalle. Arvioitu vähimmäisnäytteen koko on 20 tapausta. Välianalyysit suunnitellaan, jos näytteitä ei toimiteta tai jos näytteitä on riittävästi ensisijaisen ja toissijaisen tavoitteen saavuttamiseksi.

Näytteet ovat joko lääketieteellisistä tai kirurgisista aborttitoimenpiteistä saatuja sikiötuotteita, joiden raskausikä on vähintään 7 viikkoa amenorreaa ja enintään 14 viikkoa + 6 päivää.

Näytteiden rekrytoinnin on tarkoitus tapahtua Nancyn yliopistollisen synnytyssairaalan ortogeniapalvelussa, integroituna olemassa oleviin palveluprotokolliin (lääketieteelliset tai kirurgiset abortit) ja saatuaan selkeät ja oikeudenmukaiset tiedot ja saatujen tutkijoiden kirjallisen tietoisen suostumuksen. Asianomaisille terveydenhuollon ryhmille tiedotetaan meneillään olevasta tutkimuksesta. Tutkimuksen vaikutus potilaiden hoitoon tulee minimoida mahdollisimman paljon, jotta vältetään potilaan prosessin ja suoritettavan lääketieteellisen toimenpiteen häiriintyminen. Tämä protokolla tai tarvittaessa paikan päällä olevat tutkijat eivät saa muuttaa tai häiritä hoitoprotokollia.

Ranskan kansallisen terveysviranomaisen (HAS) toimittamien ja Ranskan kansallisen gynekologian ja synnytyskorkeakoulun (CNGOF) validoimien hyvien käytäntöjen suositusten päivityksen 2021 mukaisesti jokaiseen aborttitoimenpiteeseen sisältyy edeltävä lääkärintarkastus 5 päivän kuluessa naisen pyyntö. Tämä konsultaatio edeltää toimenpidettä muutamalla päivällä ja sen tarkoituksena on antaa potilaille tietoa itse toimenpiteestä ja selvittää sen onnistuneen toteuttamisen edellyttämät kliiniset ja parakliiniset lääketieteelliset edellytykset. Tänä aikana tutkijat eivät puutu asiaan lääketieteellisen toimenpiteen asianmukaisen täytäntöönpanon kunnioittamiseksi, mikä vaatii ratkaisevan tiedonvälityksen, jonka aikana häiriöitä on parempi välttää.

Potilastiedotus tehdystä tutkimuksesta ja kirjallisen suostumuksen saaminen suunnitellaan tapahtuvan potilaiden saapuessa gynekologian ja synnytystautien avohoitoon. Tämä vaihe, joka koostuu lyhyestä suullisesta haastattelusta sen jälkeen, kun lääkintä- ja ensiapuryhmät ovat hyväksyneet heidät, on tutkijoiden vastuulla. Se on dokumentoitu paperiasiakirjassa, joka noudattaa laillisia perustamismääräyksiä ja joka on tuotettu kahtena kappaleena. Toinen kopio säilytetään DRCI:n (kliinisen tutkimuksen ja innovaation osaston) tutkijoilla ja toinen potilaalla.

Tutkijat kirjaavat viimeisten kuukautisten päivämäärän haastattelun jälkeen. Nämä ovat ainoat sairaalassa olevilta potilailta kerätyt henkilötiedot tai lääketieteelliset tiedot. Kun toimenpide on suoritettu (lääketieteellinen tai kirurginen) ortogeniapalvelussa lääkäreiden laatiman lääketieteellisen protokollan mukaisesti, poisto- tai aspiraatiotuotteet kerätään ja pannaan välittömästi suljettuun biopatologiseen keräysastiaan, kun ne ovat vielä tuoreita.

Jokainen näyte on merkitty sisällytysnumerolla: COEF#N° ja raskausaika viikkoina laskettuna viimeisten kuukautisten alkamispäivästä. Nämä tiedot indeksoidaan systemaattisesti Excel®-laskentataulukkoon sairaalalaitoksen suojatussa tietokoneessa. Tutkijat kuljettavat näytteen viipymättä Nancyn yliopistollisen sairaalan synnytyssairaalan sikiöpatologian laboratorioon, jossa se pakastetaan nopeasti -80 °C:seen. Tuotteille tehdään alustava tutkimus kiikarimikroskoopilla kiinnostavan sikiön materiaalin eristämiseksi: kokonaiset kehot, täydelliset tai hajanaiset pääraajat, mukaan lukien ehjä kasvomassa.

Kunkin näytteen käsittely on suunniteltu standardisoitua. 10 tapauksen rekrytoinnin jälkeen jäädytetyille näytteille suoritetaan kryosektiomenetelmä käyttämällä erityistä Cryocut®-mikrotomia. Tämä vaihe mahdollistaa noin 5 mikrometrin paksuisten sarjaosien luomisen, jotka on asennettu lasilevyille. Alkuvaiheessa suoritettu tutkimusvaihe tavallisella HES-värjäyksellä mahdollistaa etmoidilohkon tarkan tunnistamisen ja sen jälkeen sarjan koronaalisten leikkeiden luomisen. Tässä kehitysvaiheessa luuston rakenteet eivät luustu, jolloin vältetään kalkinpoistovaihe. Jokainen valmistettu dia on merkitty "Tutkimusnumerolla", joka on määritetty tietokoneella ja jonka laboratorion käyttämä histologinen analyysiohjelmisto: Ariane SX® antaa automaattisesti. Nämä luvut indeksoidaan myös sähköisesti suhteessa näytetietoihin (COEF#N° ja raskausikä).

Näin luotuja objektilaseja käsitellään immunohistokemialla tai immunofluoresenssitekniikoilla.

Suunniteltuja immunohistologisia markkereita ovat: Synaptophysin (SP), Neurospesifinen enolaasi (NSE), Neuronal Cell Adhesion Molecule (NCAM) ja Oligodendrocyte Transcription Factor (OLIG2). Nämä markkerit ovat tunnettuja monoklonaalisia vasta-aineita, joihin kirjallisuudessa viitataan kypsien ja epäkypsien primääristen hajuneuronien tunnistamiseksi.

Objektien merkitsemisen jälkeen ne viedään valokuvaskannerin läpi digitaalisen tiedoston luomiseksi, joka sisältää kaikki kustakin näytteestä saadut kuvat. Jokainen tiedosto on nimetty kunkin näytteen indeksointinumeron mukaan: COEF#N°. Tallennetuissa kuvatiedostoissa on vastaava dian " Research " numero.

Tämän tutkimuksen puhtaasti kuvailevan luonteen vuoksi suunnitellaan kuvaavia tilastoja.

Analyysin jälkeen jokainen objektilasisarja säilytetään fyysisesti 4 °C:ssa sikiön patologian laboratoriossa tutkijoiden vastuulla. Tutkimuksen lopussa nämä diat ryhmitellään säilytystä varten erityiseen kokoelmaan Lorraine Biological Resources Centerissä.