Søg efter olfaktoriske celler i det føtale ethmoidepitel (COEF)

Dette forskningsprojekt er baseret på hypotesen om, at lugteepitel er til stede i slimhinden i de laterale etmoide masser, i lighed med de lugtefissurer i begyndelsen af ​​den føtale organogenese periode, og gradvist forsvinder inden udgangen af ​​første trimester i de laterale etmoide masser. som de dannes.

Denne undersøgelse har til formål at være beskrivende med det formål at identificere dette føtale lugteepitel og vurdere dets distributionsændringer i den etmoideale slimhinde, efterhånden som fosterets alder skrider frem.

Den valgte metode til at udføre denne undersøgelse er baseret på histologisk analyse ved hjælp af et standard optisk mikroskop af føtale etmoider (hele kroppe eller kun den cephalic ekstremitet afhængigt af prøvestørrelsen) for at bevare deres arkitektur. Mikroskopisk analyse vil blive koblet med immunhistokemi eller immunfluorescensteknikker for at karakterisere de interesserede celler: primære olfaktoriske neuroner.

Prøveindsamlingen vil være prospektiv, med rekruttering af fostre spredt i løbet af undersøgelsen, der strækker sig over 18 til 24 måneder. Den forventede minimumsprøvestørrelse er 20 tilfælde. Mellemliggende analyser er planlagt i tilfælde af manglende bidrag af prøver, eller hvis der er et tilstrækkeligt antal prøver til at opfylde de primære og sekundære mål.

Prøverne er føtale produkter opnået fra enten medicinske eller kirurgiske inducerede abortprocedurer med en gestationsalder på minimum 7 uger amenoré og op til 14 uger + 6 dage.

Rekruttering af prøver er planlagt til at finde sted inden for Orthogeny Service på universitetshospitalet Maternity i Nancy, integreret i eksisterende serviceprotokoller (medicinske eller kirurgiske aborter), og efter klar og retfærdig information og opnåelse af skriftligt informeret samtykke fra patienterne fra efterforskerne. De relevante sundhedsteams informeres om den igangværende forskning. Forskningens indvirkning på patientbehandlingen bør minimeres så meget som muligt for at undgå at forstyrre patientforløbet og den medicinske procedure, der udføres. Ingen behandlingsprotokoller bør modificeres eller forstyrres af denne protokol eller, om nødvendigt, af efterforskerne på stedet.

I overensstemmelse med 2021-opdateringen af ​​anbefalingerne om god praksis leveret af den franske nationale sundhedsmyndighed (HAS) og valideret af det franske nationale college for gynækologi og obstetrik (CNGOF), omfatter enhver abortprocedure en forudgående lægekonsultation afholdt inden for 5 dage efter en kvindes anmodning. Denne konsultation går nogle dage forud for proceduren og har til formål at give information om selve proceduren til patienterne og adressere de kliniske og parakliniske medicinske forudsætninger, der er nødvendige for dens succesfulde udførelse. I dette tidsrum er der ingen indgriben fra efterforskerne for at respektere den korrekte gennemførelse af den medicinske procedure, som kræver en afgørende informationsperiode, hvor interferens er at foretrække at undgå.

Patientinformation om den udførte forskning og indhentning af skriftligt samtykke er planlagt til at ske ved patienternes indlæggelse på Ambulatoriet for Gynækologi og Obstetrik. Denne fase, i form af et kort mundtligt interview efter deres indlæggelse af det medicinske og paramedicinske team, er efterforskernes ansvar. Det er dokumenteret i et papirdokument, der overholder juridiske etableringsdirektiver, fremstillet i to eksemplarer, hvor en kopi opbevares af efterforskerne for DRCI (Clinical Research and Innovation Department), og den anden opbevares af patienten.

Datoen for den sidste menstruation registreres af efterforskerne efter interviewet. Dette er de eneste personlige eller medicinske data, der indsamles fra indlagte patienter. Når proceduren er afsluttet (medicinsk eller kirurgisk) i henhold til den medicinske protokol, der er etableret af praktiserende læger i Orthogeny Service, indsamles udvisnings- eller aspirationsprodukterne og anbringes straks i en forseglet biopatologisk opsamlingsbeholder, mens de stadig er friske.

Hver prøve er markeret med et inklusionsnummer: COEF#N° og svangerskabsalderen i uger regnet fra datoen for sidste menstruation. Disse data indekseres systematisk i et Excel®-regneark på en sikker computer i hospitalsvirksomheden. Prøven transporteres øjeblikkeligt af efterforskerne til føtalpatologilaboratoriet på universitetshospitalets Maternity i Nancy til hurtig nedfrysning ved -80°C. En foreløbig undersøgelse af produkterne under et kikkertmikroskop udføres for at isolere føtalt materiale af interesse: hele kroppe, komplette eller fragmenterede cephalic ekstremiteter, inklusive den intakte ansigtsmasse.

Konditioneringen af ​​hver prøve er planlagt til at blive standardiseret. Efter rekruttering af 10 tilfælde underkastes frosne prøver en kryosektionsprocedure ved hjælp af en specifik Cryocut® mikrotom. Dette trin tillader oprettelsen af ​​serielle sektioner med en tykkelse på cirka 5 mikrometer, monteret på objektglas. En indledende ekstempore undersøgelsesfase med standard HES-farvning muliggør præcis identifikation af ethmoidblokken og efterfølgende oprettelse af en række koronale snit. På dette udviklingsstadium er skeletstrukturer ikke forbenede, hvilket undgår en afkalkningsfase. Hvert produceret objektglas er markeret med et "Research Number", computertildelt og automatisk givet af den histologiske analysesoftware, der bruges af laboratoriet: Ariane SX®. Disse tal indekseres også elektronisk i forhold til prøvedataene (COEF#N° og gestationsalder).

Serien af ​​objektglas, der således dannes, behandles med immunhistokemi eller immunfluorescensteknikker.

De planlagte immunohistologiske markører omfatter: Synaptophysin (SP), Neurospecifik Enolase (NSE), Neuronal Cell Adhesion Molecule (NCAM) og Oligodendrocyte Transcription Factor (OLIG2). Disse markører er kendte monoklonale antistoffer, der refereres til i litteraturen til identifikation af modne og umodne primære olfaktoriske neuroner.

Efter mærkning af objektglassene føres de gennem en fotografisk scanner for at generere en digital fil, der indeholder alle billederne opnået for hver prøve. Hver fil har en titel i henhold til indekseringsnummeret for hver prøve: COEF#N°. De optagede billedfiler bærer det tilsvarende dias " Research "-nummer.

I betragtning af denne undersøgelses rent beskrivende karakter er der planlagt beskrivende statistik.

Efter analyse opbevares hver serie af objektglas fysisk ved 4°C i føtalpatologilaboratoriet under efterforskernes ansvar. Ved afslutningen af ​​undersøgelsen vil disse dias blive grupperet til konservering i en dedikeret samling på Lorraine Biological Resources Center.