Поиск обонятельных клеток в эпителии решетчатой ​​кости плода (COEF)

Этот исследовательский проект основан на гипотезе о том, что обонятельный эпителий присутствует в слизистой оболочке латеральных образований решетчатой ​​кости, подобно обонятельным щелям в начале периода органогенеза плода, постепенно исчезая к концу первого триместра в латеральных образованиях решетчатой ​​кости. по мере их формирования.

Целью данного исследования является описательный характер: его цель — идентифицировать обонятельный эпителий плода и оценить изменения его распределения в слизистой решетчатой ​​кости по мере увеличения возраста плода.

Выбранный метод проведения данного исследования основан на гистологическом анализе с использованием стандартного оптического микроскопа решетчатых костей плода (всего тела или только головной конечности в зависимости от размера выборки) для сохранения их архитектуры. Микроскопический анализ будет сочетаться с методами иммуногистохимии или иммунофлуоресценции, чтобы охарактеризовать интересующие клетки: первичные обонятельные нейроны.

Сбор образцов будет проспективным, с отбором плодов в течение периода исследования, охватывающего от 18 до 24 месяцев. Ожидаемый минимальный размер выборки составляет 20 случаев. Промежуточные анализы планируются в случае отсутствия проб или при наличии достаточного количества проб для достижения основных и второстепенных целей.

Образцы представляют собой продукты плода, полученные в результате медикаментозного или хирургического аборта при сроке беременности минимум 7 недель при аменорее и до 14 недель + 6 дней.

Отбор образцов планируется проводить в отделении ортогении родильного дома университетской больницы в Нанси, в рамках существующих протоколов обслуживания (медикаментозный или хирургический аборт), и после получения четкой и достоверной информации и получения исследователями письменного информированного согласия от пациентов. Соответствующие медицинские бригады проинформированы о текущих исследованиях. Влияние исследования на уход за пациентами должно быть сведено к минимуму, насколько это возможно, чтобы не нарушать процесс лечения пациентов и проводимую медицинскую процедуру. Никакие протоколы лечения не должны быть изменены или нарушены этим протоколом или, при необходимости, исследователями на месте.

В соответствии с обновленными Рекомендациями по передовой практике от 2021 года, предоставленными Национальным управлением здравоохранения Франции (HAS) и утвержденными Французским национальным колледжем гинекологии и акушерства (CNGOF), каждая процедура аборта включает предварительную медицинскую консультацию, проводимую в течение 5 дней после просьба женщины. Эта консультация предшествует процедуре за несколько дней и направлена ​​на предоставление информации пациентам о самой процедуре и рассмотрение клинических и параклинических медицинских предпосылок, необходимых для ее успешного выполнения. В течение этого времени следователи не вмешиваются в обеспечение надлежащего проведения медицинской процедуры, что требует крайне важного информационного периода, в течение которого вмешательства предпочтительно избегать.

Информирование пациентов о проведенном исследовании и получение письменного согласия планируется осуществлять при поступлении пациенток в амбулаторное отделение гинекологии и акушерства. Ответственность за этот этап, осуществляемый медицинской и парамедицинской бригадой в форме краткого устного собеседования после их поступления, возлагается на следователей. Это документируется в бумажном документе, соответствующем директивам юридического учреждения, составленном в двух экземплярах, при этом один экземпляр остается у следователей в DRCI (Отдел клинических исследований и инноваций), а второй остается у пациента.

Дата последней менструации фиксируется следователями после допроса. Это единственные личные или медицинские данные, собранные у госпитализированных пациентов. После завершения процедуры (медицинской или хирургической) в соответствии с медицинским протоколом, установленным практикующими врачами Службы ортогенеза, продукты изгнания или аспирации собираются и немедленно помещаются в запечатанный контейнер для биопатологического сбора, пока они еще свежие.

Каждый образец маркируется номером включения: COEF#N° и сроком беременности в неделях, рассчитанным от даты последней менструации. Эти данные систематически индексируются в электронной таблице Excel® на защищенном компьютере в больнице. Образец незамедлительно доставляется исследователями в лабораторию патологии плода родильного дома Университетского госпиталя в Нанси для быстрого замораживания при температуре -80°C. Проводят предварительное исследование продуктов под бинокулярным микроскопом для выделения интересующего эмбрионального материала: целых тел, целых или фрагментированных головных конечностей, включая интактную массу лица.

Кондиционирование каждого образца планируется стандартизировать. После набора 10 случаев замороженные образцы подвергаются процедуре криоссекции с использованием специального микротома Cryocut®. Этот шаг позволяет создавать серийные срезы толщиной около 5 микрометров, закрепленные на предметных стеклах. Начальный этап экстемпорального обследования со стандартным окрашиванием HES позволяет точно идентифицировать блок решетчатой ​​кости и впоследствии создать серию корональных срезов. На этой стадии развития скелетные структуры не оссифицируются, что позволяет избежать фазы декальцинации. На каждом полученном предметном стекле маркируется «номер исследования», который присваивается компьютером и автоматически присваивается программным обеспечением для гистологического анализа, используемым лабораторией: Ariane SX®. Эти числа также индексируются в электронном виде в соответствии с данными образца (COEF#N° и срок беременности).

Созданную таким образом серию слайдов обрабатывают методами иммуногистохимии или иммунофлуоресценции.

Запланированные иммуногистологические маркеры включают: синаптофизин (SP), нейроспецифическую енолазу (NSE), молекулу адгезии нейрональных клеток (NCAM) и фактор транскрипции олигодендроцитов (OLIG2). Эти маркеры представляют собой известные моноклональные антитела, упомянутые в литературе для идентификации зрелых и незрелых первичных обонятельных нейронов.

После маркировки слайдов их пропускают через фотографический сканер для создания цифрового файла, содержащего все изображения, полученные для каждого образца. Каждому файлу присваивается название в соответствии с индексным номером каждого образца: COEF#N°. Записанные файлы изображений имеют соответствующий номер слайда «Исследование».

Учитывая чисто описательный характер данного исследования, планируется описательная статистика.

После анализа каждая серия слайдов физически хранится при температуре 4°C в лаборатории патологии плода под ответственностью исследователей. В конце исследования эти слайды будут сгруппированы для сохранения в специальной коллекции в Центре биологических ресурсов Лотарингии.