供体CIRBP与移植肾功能的相关性研究

该研究是一项回顾性开放队列研究，纳入了 2016 年 1 月至 2019 年 12 月期间死亡的患者。 它遵循中国国家死者器官捐献计划的指导方针，并由中山大学附属第三医院的成功肾脏捐献者参与。 如果捐献者符合以下任何条件，则被排除在外： (a) 缺乏血液样本； (b) 血液样本受污染，影响 CIRBP 水平； (c) 是接受联合多器官移植的受者； (d) 正在参加其他临床试验； (e) 有器官移植史； (f)有研究者认为不适合入组的其他情况。 器官采购组织（OPO）从捐献者那里收集血液样本，并在捐献者同意的情况下用于各种研究。 所有受者（207 名受者，207 名供者）在移植后均进行了长期随访。

调查人员遵循《赫尔辛基宣言》(20) 和《伊斯坦布尔宣言》中概述的原则。 本研究获得中山大学人体器官移植伦理委员会批准。 伦理委员会是根据世界卫生组织《生物医学研究伦理委员会审查操作指南》成立的。 器官分配是通过中国器官移植反应系统以公平、透明的方式进行的。 捐献类型由捐献者家属自愿决定，受者接受移植后进行随访。 捐赠者的家人和接受者都同意在研究中使用样本和临床数据。

捐献者数据来自中国器官移植反应系统，由器官移植组织成员填写。 此外，一些捐赠者信息是从临床电子病历中补充的。 接收者数据仅来自临床电子记录。 研究人员根据受者的早期肾功能状态将供者和受者分为延迟移植功能（DGF）和即刻移植功能（IGF）组。 DGF定义为术后1周内连续3天每日血浆肌酐较前一天下降小于10%，或术后1周内血清肌酐（SCr）未降至400μmol/L。 未产生 DGF 的接受者被归类为 IGF。 原发性无功能（PNF）是在手术或再移植后需要持续透析的患者中诊断出来的。 此外，扩展标准供体被定义为年龄超过 60 岁或 50 至 59 岁且满足以下标准中至少两项的供体：最终血清肌酐 > 133 μmol/L，死因为脑血管意外，并且有以下病史：高血压。

样本采集 器官摘取前在手术室从捐献者身上获取全血样本，并通过碎冰运送至实验室，平均运送时间为2小时。 对于血清制备，将全血样本在室温下放置2小时，然后在2-8°C的温度下以1000g离心15分钟。 收集所得上清液并在实验室内储存于-80°C。 测试前，将血清样品在碎冰上解冻，并在 2-8°C 下再次以 1000 g 离心 15 分钟。

冷诱导RNA结合蛋白水平的测量使用ELISA试剂盒(CSB-EL005440HU)检测血清CIRBP。 按照说明稀释蛋白质标准品，将 100 µl 不同浓度的标准品和样品（1:10 稀释）加到 96 孔板中，一式两份。 将板在黑暗中37°C孵育2小时。 孵育后，弃去孔内液体，每孔加入100μl生物素标记抗体工作液。 37℃孵育1小时后，用洗涤液洗涤板3次。 随后，向每孔中加入 100 µl 辣根过氧化物酶标记的亲和溶液。 在 37°C 下再孵育 1 小时后，将板洗涤五次。 然后，每孔加入90μl底物溶液，37℃显色15分钟后，用50μl终止液终止反应。 使用酶标仪在 5 分钟内测量 450 nm 处的吸光度，并根据标准曲线计算浓度。