Studie av sambandet mellan donator CIRBP och transplanterad njurfunktion

Studien var en retrospektiv öppen kohortstudie som inkluderade avlidna patienter från januari 2016 till december 2019. Den följde riktlinjerna för det nationella programmet för avlidna organdonationer i Kina och involverade framgångsrika njurdonatorer från det tredje anslutna sjukhuset vid Sun Yat-sen University. Donatorer uteslöts om de uppfyllde något av följande villkor: (a) saknade ett blodprov; (b) hade kontaminerade blodprover som påverkade CIRBP-nivåerna; (c) var mottagare som genomgick kombinerade multiorgantransplantationer; (d) deltog i andra kliniska prövningar; (e) haft en historia av organtransplantation; (f) hade andra förhållanden som utredaren bedömde som olämpliga för registrering. Blodprover togs från donatorer av Organ Procurement Organisations (OPOs) och användes för olika studier med donatorernas samtycke. Alla mottagare (207 mottagare, 207 givare) följdes upp på lång sikt efter transplantation.

Utredarna följde principerna i Helsingforsdeklarationen (20) och Istanbuldeklarationen. Godkännande för denna studie erhölls från Human Organ Transplantation and Ethics Committee vid Sun Yat-sen University. Etikkommittén bildades i enlighet med Världshälsoorganisationens operativa riktlinjer för etikkommitténs granskning av biomedicinsk forskning. Organtilldelningen utfördes på ett rättvist och transparent sätt via det kinesiska organtransplantationsresponssystemet. Typen av donation bestämdes frivilligt av donatorns familj och mottagaren genomgick uppföljning efter transplantation. Både donatorns familj och mottagaren lämnade samtycke till användning av prover och kliniska data i forskning.

Donatordata erhölls från China Organ Transplant Response System, kompletterat av medlemmar i organtransplantationsorganisationer. Dessutom kompletterades viss donatorinformation från kliniska elektroniska journaler. Mottagardata härleddes enbart från kliniska elektroniska register. Utredarna kategoriserade givare och mottagare i grupper med fördröjd transplantatfunktion (DGF) och omedelbar transplantatfunktion (IGF) baserat på mottagarens tidiga njurfunktionsstatus. DGF definierades som en minskning av daglig plasmakreatinin med mindre än 10 % från föregående dag under 3 dagar i följd inom 1 vecka postoperativt, eller om serumkreatinin (SCr) inte minskade till 400 μmol/L inom 1 vecka efter operationen. Mottagare som inte utvecklade DGF kategoriserades som IGF. Primär icke-funktion (PNF) diagnostiserades hos patienter som behövde kontinuerlig dialys efter operation eller omtransplantation. Dessutom definierades donatorer med förbrukade kriterier som de som är över 60 år eller mellan 50 och 59 år som uppfyller minst två av följande kriterier: slutligt serumkreatinin > 133 μmol/L, cerebrovaskulär olycka som dödsorsak och en historia av hypertoni.

Provtagning Helblodsprover togs från givaren på operationssalen före organuttag och transporterades på krossad is till laboratoriet, med en genomsnittlig transittid på 2 timmar. För serumberedning lämnades helblodsproverna vid rumstemperatur i 2 timmar, och centrifugerades sedan vid 1000 g under 15 minuter vid en temperatur av 2-8°C. Den resulterande supernatanten uppsamlades och förvarades vid -80°C i laboratoriet. Före testning tinades serumproverna på krossad is och centrifugerades igen vid 1000 g under 15 minuter vid 2-8°C.

Mätning av kallinducerbart RNA-bindande proteinnivå Serum CIRBP detekterades med användning av ett ELISA-kit (CSB-EL005440HU). Proteinstandarden späddes ut enligt instruktionerna och 100 µl av olika koncentrationer av standard och prover (1:10 spädning) sattes till en 96-brunnars platta i duplikat. Plattan inkuberades vid 37°C under 2 timmar i mörker. Efter inkubation kastades vätskan i brunnarna och 100 ul biotinmärkt antikroppsarbetslösning tillsattes till varje brunn. Efter inkubering vid 37°C under 1 timme tvättades plattan tre gånger med tvättlösning. Därefter tillsattes 100 ul pepparrotsperoxidas-märkt affinitetslösning till varje brunn. Efter ytterligare 1 timmes inkubation vid 37°C tvättades plattan fem gånger. Sedan sattes 90 ul substratlösning till varje brunn och efter 15 minuters färgframkallning vid 37°C användes 50 ul termineringslösning för att stoppa reaktionen. Absorbansen mättes vid 450 nm inom 5 minuter med användning av en mikroplattläsare, och koncentrationerna beräknades baserat på standardkurvan.