Estudio de la correlación entre CIRBP del donante y la función del riñón trasplantado

El estudio fue un estudio de cohorte abierto retrospectivo que incluyó pacientes fallecidos desde enero de 2016 hasta diciembre de 2019. Se adhirió a las directrices del Programa Nacional para la Donación de Órganos de Fallecidos en China e involucró a donantes exitosos de riñón del Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Sun Yat-sen. Los donantes fueron excluidos si cumplían alguna de las siguientes condiciones: (a) carecían de una muestra de sangre; (b) tenía muestras de sangre contaminadas que afectaban los niveles de CIRBP; (c) fueron receptores que se sometieron a trasplantes multiorgánicos combinados; (d) estaban participando en otros ensayos clínicos; (e) tenía antecedentes de trasplante de órganos; (f) tenía otras condiciones consideradas inadecuadas para la inscripción por el investigador. Las Organizaciones de Obtención de Órganos (OPO, por sus siglas en inglés) recolectaron muestras de sangre de los donantes y las utilizaron para diversos estudios con el consentimiento de los donantes. Todos los receptores (207 receptores, 207 donantes) fueron seguidos a largo plazo después del trasplante.

Los investigadores siguieron los principios descritos en la Declaración de Helsinki (20) y la Declaración de Estambul. La aprobación para este estudio se obtuvo del Comité de Ética y Trasplante de Órganos Humanos de la Universidad Sun Yat-sen. El Comité de Ética se formó de conformidad con las Directrices operativas para la revisión del comité de ética de la investigación biomédica de la Organización Mundial de la Salud. La asignación de órganos se realizó de manera justa y transparente a través del Sistema Chino de Respuesta a Trasplantes de Órganos. El tipo de donación fue determinado voluntariamente por la familia del donante y el receptor fue sometido a seguimiento después del trasplante. Tanto la familia del donante como la del receptor dieron su consentimiento para el uso de muestras y datos clínicos en la investigación.

Los datos de los donantes se obtuvieron del Sistema de Respuesta al Trasplante de Órganos de China, completados por miembros de organizaciones de trasplante de órganos. Además, parte de la información de los donantes se complementó con registros médicos clínicos electrónicos. Los datos de los destinatarios se derivaron únicamente de registros clínicos electrónicos. Los investigadores clasificaron a los donantes y receptores en grupos de función retardada del injerto (DGF) y función inmediata del injerto (IGF) según el estado temprano de la función renal del receptor. El DGF se definió como una disminución de la creatinina plasmática diaria de menos del 10 % con respecto al día anterior durante 3 días consecutivos dentro de la semana posterior a la operación, o si la creatinina sérica (SCr) no disminuyó a 400 μmol/L dentro de la semana posterior a la cirugía. Los receptores que no desarrollaron DGF se clasificaron como IGF. La disfunción primaria (FNP) se diagnosticó en pacientes que requirieron diálisis continua después de la cirugía o el retrasplante. Además, se definieron como donantes de criterios gastados aquellos mayores de 60 años, o entre 50 y 59 años que cumplían al menos dos de los siguientes criterios: creatinina sérica final > 133 μmol/L, accidente cerebrovascular como causa de muerte y antecedentes de hipertensión.

Recolección de muestras Se obtuvieron muestras de sangre completa del donante en el quirófano antes de la extracción del órgano y se transportaron en hielo picado al laboratorio, con una duración promedio de tránsito de 2 horas. Para la preparación del suero, las muestras de sangre completa se dejaron a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se centrifugaron a 1000 g durante 15 minutos a una temperatura de 2-8°C. El sobrenadante resultante se recogió y almacenó a -80°C en el laboratorio. Antes de la prueba, las muestras de suero se descongelaron en hielo picado y se centrifugaron nuevamente a 1000 g durante 15 minutos a 2-8°C.

Medición del nivel de proteína de unión a ARN inducible en frío La CIRBP sérica se detectó utilizando un kit ELISA (CSB-EL005440HU). El estándar de proteína se diluyó según las instrucciones y se añadieron 100 µl de diferentes concentraciones de estándar y muestras (dilución 1:10) a una placa de 96 pocillos por duplicado. La placa se incubó a 37°C durante 2 horas en la oscuridad. Después de la incubación, se descartó el líquido de los pocillos y se añadieron a cada pocillo 100 µl de solución de trabajo de anticuerpo marcado con biotina. Después de incubar a 37°C durante 1 hora, la placa se lavó tres veces con solución de lavado. Posteriormente, se añadieron a cada pocillo 100 µl de solución de afinidad marcada con peroxidasa de rábano picante. Después de una incubación adicional de 1 hora a 37°C, la placa se lavó cinco veces. Luego, se añadieron 90 µl de solución de sustrato a cada pocillo y, después de un desarrollo de color de 15 minutos a 37°C, se usaron 50 µl de solución de terminación para detener la reacción. La absorbancia se midió a 450 nm en 5 minutos utilizando un lector de microplacas y las concentraciones se calcularon basándose en la curva estándar.