Studio della correlazione tra CIRBP del donatore e funzione renale trapiantata

Lo studio era uno studio retrospettivo di coorte aperto che includeva pazienti deceduti da gennaio 2016 a dicembre 2019. Ha aderito alle linee guida del Programma nazionale per la donazione di organi da defunti in Cina e ha coinvolto donatori di rene di successo del Terzo Ospedale affiliato dell'Università di Sun Yat-sen. I donatori venivano esclusi se soddisfacevano una delle seguenti condizioni: (a) mancavano un campione di sangue; (b) aveva campioni di sangue contaminati che influenzavano i livelli CIRBP; (c) erano riceventi sottoposti a trapianto multiorgano combinato; (d) partecipavano ad altri studi clinici; (e) ha avuto una storia di trapianto di organi; (f) presentavano altre condizioni ritenute inadatte per l'arruolamento da parte dello sperimentatore. I campioni di sangue sono stati raccolti dai donatori dalle Organizzazioni per l'approvvigionamento di organi (OPO) e utilizzati per vari studi con il consenso dei donatori. Tutti i riceventi (207 riceventi, 207 donatori) sono stati seguiti a lungo termine dopo il trapianto.

Gli investigatori hanno seguito i principi delineati nella Dichiarazione di Helsinki (20) e nella Dichiarazione di Istanbul. L'approvazione per questo studio è stata ottenuta dal Comitato etico e per i trapianti di organi umani dell'Università di Sun Yat-sen. Il Comitato Etico è stato costituito in conformità alle Linee Guida Operative dell'Organizzazione Mondiale della Sanità per la Revisione della Ricerca Biomedica da parte del Comitato Etico. L’assegnazione degli organi è stata eseguita in modo equo e trasparente tramite il sistema cinese di risposta ai trapianti di organi. Il tipo di donazione è stato determinato volontariamente dalla famiglia del donatore e il ricevente è stato sottoposto a follow-up dopo il trapianto. Sia la famiglia del donatore che quella del ricevente hanno fornito il consenso per l'utilizzo dei campioni e dei dati clinici nella ricerca.

I dati dei donatori sono stati ottenuti dal China Organ Transplant Response System, completato da membri di organizzazioni di trapianti di organi. Inoltre, alcune informazioni sui donatori sono state integrate dalle cartelle cliniche elettroniche. I dati dei destinatari sono stati derivati ​​esclusivamente dalle cartelle cliniche elettroniche. I ricercatori hanno classificato i donatori e i riceventi in gruppi con funzione di trapianto ritardato (DGF) e con funzione di trapianto immediato (IGF) in base allo stato di funzionalità renale precoce del ricevente. La DGF è stata definita come una diminuzione della creatinina plasmatica giornaliera inferiore al 10% rispetto al giorno precedente per 3 giorni consecutivi entro 1 settimana dopo l'intervento, o se la creatinina sierica (SCr) non è diminuita a 400 μmol/L entro 1 settimana dopo l'intervento. I destinatari che non hanno sviluppato DGF sono stati classificati come IGF. La non funzione primaria (PNF) è stata diagnosticata in pazienti che necessitavano di dialisi continua dopo un intervento chirurgico o un nuovo trapianto. Inoltre, sono stati definiti donatori secondo i criteri previsti quelli di età superiore a 60 anni o tra 50 e 59 anni che soddisfacevano almeno due dei seguenti criteri: creatinina sierica finale > 133 μmol/L, accidente cerebrovascolare come causa di morte e una storia di ipertensione.

Raccolta dei campioni I campioni di sangue intero sono stati ottenuti dal donatore in sala operatoria prima del prelievo degli organi e trasportati su ghiaccio tritato al laboratorio, con una durata media di transito di 2 ore. Per la preparazione del siero, i campioni di sangue intero sono stati lasciati a temperatura ambiente per 2 ore, quindi centrifugati a 1000 g per 15 minuti ad una temperatura di 2-8°C. Il surnatante risultante è stato raccolto e conservato a -80°C all'interno del laboratorio. Prima del test, i campioni di siero sono stati scongelati su ghiaccio tritato e nuovamente centrifugati a 1000 g per 15 minuti a 2-8°C.

La misurazione del CIRBP sierico a livello di proteine ​​leganti l'RNA inducibile a freddo è stata rilevata utilizzando un kit ELISA (CSB-EL005440HU). Lo standard proteico è stato diluito secondo le istruzioni e 100 µl di diverse concentrazioni di standard e campioni (diluizione 1:10) sono stati aggiunti ad una piastra a 96 pozzetti in duplicato. La piastra è stata incubata a 37°C per 2 ore al buio. Dopo l'incubazione, il liquido nei pozzetti è stato scartato e a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 µl di soluzione di lavoro di anticorpi marcati con biotina. Dopo aver incubato a 37°C per 1 ora, la piastra è stata lavata tre volte con soluzione di lavaggio. Successivamente, a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 µl di soluzione di affinità marcata con perossidasi di rafano. Dopo un'ulteriore incubazione di 1 ora a 37°C, la piastra è stata lavata cinque volte. Quindi, a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 90 µl di soluzione di substrato e, dopo uno sviluppo del colore di 15 minuti a 37°C, sono stati utilizzati 50 µl di soluzione di terminazione per arrestare la reazione. L'assorbanza è stata misurata a 450 nm entro 5 minuti utilizzando un lettore di micropiastre e le concentrazioni sono state calcolate in base alla curva standard.