Studie korelace mezi CIRBP dárce a funkcí transplantované ledviny

Studie byla retrospektivní otevřená kohortová studie, která zahrnovala zemřelé pacienty od ledna 2016 do prosince 2019. Dodržela pokyny Národního programu pro dárcovství orgánů od zemřelých v Číně a zapojila se do něj úspěšní dárci ledvin ze třetí přidružené nemocnice Sunjatsenovy univerzity. Dárci byli vyloučeni, pokud splnili kteroukoli z následujících podmínek: (a) postrádali krevní vzorek; (b) měl kontaminované krevní vzorky ovlivňující hladiny CIRBP; c) byli příjemci, kteří podstoupili kombinované transplantace více orgánů; d) účastnili se jiných klinických hodnocení; e) měl v anamnéze transplantaci orgánů; f) měl jiné podmínky, které vyšetřovatel považoval za nevhodné pro zařazení. Vzorky krve byly odebrány dárcům organizacemi pro odběr orgánů (OPO) a použity pro různé studie se souhlasem dárců. Všichni příjemci (207 příjemců, 207 dárců) byli po transplantaci dlouhodobě sledováni.

Vyšetřovatelé se řídili principy nastíněnými v Helsinské deklaraci (20) a Istanbulské deklaraci. Schválení pro tuto studii bylo získáno od výboru pro transplantaci lidských orgánů a etické komise Sun Yat-sen University. Etická komise byla vytvořena v souladu s Operačními směrnicemi Světové zdravotnické organizace pro hodnocení biomedicínského výzkumu etické komise. Přidělování orgánů bylo provedeno spravedlivým a transparentním způsobem prostřednictvím čínského systému odezvy na transplantaci orgánů. Typ dárcovství dobrovolně určila rodina dárce a příjemce podstoupil po transplantaci sledování. Rodina dárce i příjemce poskytli souhlas s použitím vzorků a klinických dat ve výzkumu.

Údaje o dárcích byly získány z China Organ Transplant Response System, doplněného členy organizací pro transplantaci orgánů. Některé informace o dárcích byly navíc doplněny z klinických elektronických lékařských záznamů. Údaje o příjemcích byly odvozeny pouze z klinických elektronických záznamů. Výzkumníci kategorizovali dárce a příjemce do skupin opožděné funkce štěpu (DGF) a okamžité funkce štěpu (IGF) na základě stavu časné funkce ledvin příjemce. DGF byl definován jako pokles denního plazmatického kreatininu o méně než 10 % oproti předchozímu dni po 3 po sobě jdoucí dny během 1 týdne po operaci, nebo pokud se sérový kreatinin (SCr) nesnížil na 400 μmol/l během 1 týdne po operaci. Příjemci, u kterých se nevyvinul DGF, byli kategorizováni jako IGF. Primární nefunkčnost (PNF) byla diagnostikována u pacientů vyžadujících kontinuální dialýzu po operaci nebo retransplantaci. Kromě toho byli dárci s vynaloženými kritérii definováni jako dárci ve věku nad 60 let nebo ve věku 50 až 59 let, kteří splňují alespoň dvě z následujících kritérií: konečný sérový kreatinin > 133 μmol/l, cerebrovaskulární příhoda jako příčina smrti a anamnéza hypertenze.

Odběr vzorků Vzorky plné krve byly získány od dárce na operačním sále před odběrem orgánů a transportovány na drceném ledu do laboratoře s průměrnou dobou trvání 2 hodiny. Pro přípravu séra byly vzorky plné krve ponechány při pokojové teplotě po dobu 2 hodin, poté centrifugovány při 1000 g po dobu 15 minut při teplotě 2-8 °C. Výsledný supernatant byl shromážděn a skladován při -80 °C v laboratoři. Před testováním byly vzorky séra rozmraženy na drceném ledu a znovu centrifugovány při 1000 g po dobu 15 minut při 2-8 °C.

Měření hladiny chladem indukovatelného proteinu vázajícího RNA Sérový CIRBP byl detekován pomocí soupravy ELISA (CSB-EL005440HU). Proteinový standard byl zředěn podle pokynů a 100 ul různých koncentrací standardu a vzorků (ředění 1:10) bylo přidáno do 96-jamkové destičky v duplikátech. Destička byla inkubována při 37 °C po dobu 2 hodin ve tmě. Po inkubaci byla kapalina v jamkách odstraněna a do každé jamky bylo přidáno 100 ul pracovního roztoku biotinem značené protilátky. Po inkubaci při 37 °C po dobu 1 hodiny byla destička promyta třikrát promývacím roztokem. Následně bylo do každé jamky přidáno 100 ul afinitního roztoku značeného křenovou peroxidázou. Po další 1 hodině inkubace při 37 °C byla destička pětkrát promyta. Poté bylo do každé jamky přidáno 90 ul roztoku substrátu a po 15 minutovém vývoji barvy při 37 °C bylo k zastavení reakce použito 50 ul roztoku pro ukončení reakce. Absorbance byla měřena při 450 nm během 5 minut pomocí čtečky mikrodestiček a koncentrace byly vypočteny na základě standardní křivky.