Исследование корреляции между донорским CIRBP и функцией трансплантированной почки

Исследование представляло собой ретроспективное открытое когортное исследование, в которое вошли умершие пациенты с января 2016 года по декабрь 2019 года. Он придерживался руководящих принципов Национальной программы донорства органов умерших в Китае и привлекал успешных доноров почек из Третьей дочерней больницы Университета Сунь Ятсена. Доноры исключались из исследования, если они отвечали любому из следующих условий: (а) у них не было образца крови; (b) имели контаминированные образцы крови, влияющие на уровни CIRBP; (c) были реципиентами, перенесшими комбинированную трансплантацию нескольких органов; (г) участвовали в других клинических исследованиях; (д) имели историю трансплантации органов; (f) имел другие условия, которые следователь счел неподходящими для зачисления. Образцы крови были собраны у доноров организациями по закупкам органов (ОПО) и использованы для различных исследований с согласия доноров. Все реципиенты (207 реципиентов, 207 доноров) находились под наблюдением в отдаленные сроки после трансплантации.

Следователи следовали принципам, изложенным в Хельсинкской декларации (20) и Стамбульской декларации. Одобрение этого исследования было получено от Комитета по трансплантации человеческих органов и этике Университета Сунь Ятсена. Комитет по этике был сформирован в соответствии с «Руководством Всемирной организации здравоохранения по рассмотрению комитетом по этике биомедицинских исследований». Распределение органов осуществлялось справедливым и прозрачным образом через китайскую систему реагирования на трансплантацию органов. Тип донорства добровольно определялся семьей донора, а реципиент находился под наблюдением после трансплантации. И семья донора, и реципиент дали согласие на использование образцов и клинических данных в исследованиях.

Данные о донорах были получены из Китайской системы реагирования на трансплантацию органов, заполненной членами организаций по трансплантации органов. Кроме того, некоторая информация о донорах была дополнена из клинических электронных медицинских карт. Данные о получателях были получены только из клинических электронных записей. Исследователи разделили доноров и реципиентов на группы отсроченной функции трансплантата (DGF) и немедленной функции трансплантата (IGF) в зависимости от раннего состояния функции почек реципиента. DGF определяли как снижение ежедневного уровня креатинина плазмы менее чем на 10% по сравнению с предыдущим днем ​​в течение 3 дней подряд в течение 1 недели после операции или если креатинин сыворотки (SCr) не снижался до 400 мкмоль/л в течение 1 недели после операции. Реципиенты, у которых не развился DGF, были отнесены к категории IGF. Первичная нефункция (ПНФ) диагностировалась у пациентов, нуждающихся в постоянном диализе после операции или ретрансплантации. Кроме того, донорами с расширенными критериями считались лица в возрасте старше 60 лет или в возрасте от 50 до 59 лет, отвечающие как минимум двум из следующих критериев: конечный уровень креатинина сыворотки > 133 мкмоль/л, нарушение мозгового кровообращения как причина смерти и анамнез гипертония.

Сбор проб Образцы цельной крови были получены от донора в операционной перед извлечением органов и доставлены на колотом льду в лабораторию, средняя продолжительность транзита составляла 2 часа. Для приготовления сыворотки образцы цельной крови оставляли при комнатной температуре на 2 часа, затем центрифугировали при 1000 g в течение 15 минут при температуре 2-8°С. Полученный супернатант собирали и хранили при -80°С в лаборатории. Перед тестированием образцы сыворотки оттаивали на колотом льду и повторно центрифугировали при 1000 g в течение 15 минут при 2-8°С.

Измерение уровня холодового индуцируемого РНК-связывающего белка в сыворотке CIRBP определяли с использованием набора ELISA (CSB-EL005440HU). Стандарт белка разводили в соответствии с инструкциями и в 96-луночный планшет в двух экземплярах добавляли по 100 мкл стандарта и образцов различных концентраций (разведение 1:10). Планшет инкубировали при 37°С в течение 2 часов в темноте. После инкубации жидкость из лунок сливали и в каждую лунку добавляли по 100 мкл рабочего раствора антител, меченных биотином. После инкубации при 37°С в течение 1 часа планшет трижды промывали промывающим раствором. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл аффинного раствора, меченного пероксидазой хрена. После дополнительной 1-часовой инкубации при 37°С планшет промывали пять раз. Затем в каждую лунку добавляли по 90 мкл раствора субстрата и после 15-минутного развития окраски при 37°C использовали 50 мкл раствора терминации для остановки реакции. Поглощение измеряли при длине волны 450 нм в течение 5 минут с использованием микропланшет-ридера, а концентрации рассчитывали на основе стандартной кривой.