기증자 CIRBP와 이식된 신장 기능의 상관관계 연구

이번 연구는 2016년 1월부터 2019년 12월까지 사망한 환자를 대상으로 한 후향적 공개 코호트 연구였다. 이 프로젝트는 중국의 국가 사망 장기 기증 프로그램 지침을 준수했으며 쑨원대학교 제3부속병원의 성공적인 신장 기증자들이 참여했습니다. 기증자는 다음 조건 중 하나라도 충족하는 경우 제외되었습니다. (a) 혈액 표본이 부족함; (b) CIRBP 수준에 영향을 미치는 오염된 혈액 표본이 있었습니다. (c) 복합 다기관 이식을 받은 수혜자였습니다. (d) 다른 임상 시험에 참여하고 있었습니다. (e) 장기 이식 병력이 있는 경우; (f) 조사관이 등록에 적합하지 않다고 간주하는 기타 조건이 있는 경우. 장기 조달 기관(OPO)이 기증자로부터 혈액 검체를 수집하여 기증자의 동의를 받아 다양한 연구에 사용했습니다. 모든 수혜자(수혜자 207명, 기증자 207명)를 이식 후 장기간 추적 관찰했습니다.

조사관들은 헬싱키 선언(20)과 이스탄불 선언에 설명된 원칙을 따랐습니다. 이 연구에 대한 승인은 Sun Yat-sen University의 인간 장기 이식 및 윤리 위원회로부터 획득되었습니다. 윤리위원회는 세계보건기구(WHO)의 생명의학 연구 윤리위원회 검토 운영 지침을 준수하여 구성되었습니다. 장기 할당은 중국 장기 이식 대응 시스템을 통해 공정하고 투명한 방식으로 수행되었습니다. 기증 유형은 기증자의 가족이 자발적으로 결정했으며, 이식 후 수혜자는 추적관찰을 받았습니다. 기증자의 가족과 수혜자 모두 연구에 샘플과 임상 데이터를 사용하는 데 동의했습니다.

기증자 데이터는 장기 이식 조직의 구성원이 완성한 중국 장기 이식 대응 시스템에서 얻었습니다. 또한 일부 기증자 정보는 임상 전자 의료 기록에서 보완되었습니다. 수신자 데이터는 임상 전자 기록에서만 파생되었습니다. 연구자들은 수혜자의 초기 신장 기능 상태에 따라 기증자와 수혜자를 지연 이식 기능(DGF) 그룹과 즉시 이식 기능(IGF) 그룹으로 분류했습니다. DGF는 수술 후 1주 이내에 일일 혈장 크레아티닌이 3일 연속 전날 대비 10% 미만 감소하거나, 수술 후 1주 이내에 혈청 크레아티닌(SCr)이 400 μmol/L 이하로 감소하지 않은 경우로 정의됩니다. DGF가 발생하지 않은 수혜자는 IGF로 분류되었습니다. 원발성 비기능(PNF)은 수술이나 재이식 후 지속적인 투석이 필요한 환자에서 진단되었습니다. 또한, 확장 기준 기증자는 60세 이상 또는 50~59세 사이에서 다음 기준 중 최소 두 가지를 충족하는 사람으로 정의되었습니다: 최종 혈청 크레아티닌 > 133μmol/L, 사망 원인인 뇌혈관 사고, 다음의 병력 고혈압.

샘플 수집 장기 회수 전 수술실에서 기증자로부터 전혈 샘플을 채취하여 분쇄된 얼음에 담아 실험실로 운반했으며, 평균 운송 시간은 2시간이었습니다. 혈청 제조를 위해 전혈 검체를 실온에서 2시간 동안 방치한 후, 1000g에서 15분간 2~8℃에서 원심분리하였다. 생성된 상층액을 수집하여 실험실 내 -80°C에 보관했습니다. 테스트 전, 혈청 샘플을 분쇄된 얼음 위에서 해동하고 2-8°C에서 15분간 1000g으로 다시 원심분리했습니다.

저온 유도성 RNA 결합 단백질 수준 혈청 CIRBP의 측정은 ELISA 키트(CSB-EL005440HU)를 사용하여 검출되었습니다. 단백질 표준물은 지침에 따라 희석되었고, 100μl의 서로 다른 농도의 표준물과 샘플(1:10 희석)을 96웰 플레이트에 이중으로 첨가했습니다. 플레이트를 암실에서 2시간 동안 37℃에서 배양하였다. 인큐베이션 후, 웰의 액체를 버리고, 100 μl의 비오틴 표지 항체 작업 용액을 각 웰에 첨가했습니다. 37℃에서 1시간 동안 배양한 후, 플레이트를 세척액으로 3회 세척하였다. 이어서, 양 고추 냉이 퍼옥시다아제가 표지된 친화성 용액 100 μl를 각 웰에 첨가했습니다. 37°C에서 1시간 더 배양한 후, 플레이트를 5회 세척했습니다. 그런 다음 기질 용액 90 μl를 각 웰에 첨가하고 37°C에서 15분간 발색시킨 후 종결 용액 50 μl를 사용하여 반응을 정지시켰습니다. 마이크로플레이트 리더를 이용하여 5분 이내에 450nm에서 흡광도를 측정하고, 표준곡선을 바탕으로 농도를 계산하였다.