Étude de la corrélation entre le CIRBP du donneur et la fonction rénale transplantée

Il s’agissait d’une étude de cohorte rétrospective ouverte incluant des patients décédés de janvier 2016 à décembre 2019. Il a adhéré aux directives du Programme national pour les dons d'organes décédés en Chine et a impliqué des donneurs de rein réussis du troisième hôpital affilié de l'Université Sun Yat-sen. Les donneurs étaient exclus s'ils remplissaient l'une des conditions suivantes : (a) il leur manquait un échantillon de sang ; (b) avait des échantillons de sang contaminés affectant les niveaux de CIRBP ; (c) étaient des receveurs ayant subi des greffes combinées de plusieurs organes ; (d) participaient à d'autres essais cliniques ; (e) avait des antécédents de transplantation d’organes ; (f) présentait d'autres conditions jugées inappropriées pour l'inscription par l'enquêteur. Des échantillons de sang ont été collectés auprès de donneurs par des organismes d'approvisionnement en organes (OPO) et utilisés pour diverses études avec le consentement des donneurs. Tous les receveurs (207 receveurs, 207 donneurs) ont été suivis au long terme après la transplantation.

Les enquêteurs ont suivi les principes énoncés dans la Déclaration d'Helsinki (20) et la Déclaration d'Istanbul. L’approbation de cette étude a été obtenue du comité d’éthique et de transplantation d’organes humains de l’université Sun Yat-sen. Le comité d'éthique a été formé conformément aux directives opérationnelles de l'Organisation mondiale de la santé pour l'examen par le comité d'éthique de la recherche biomédicale. L'attribution d'organes a été effectuée de manière équitable et transparente via le système chinois de réponse aux transplantations d'organes. Le type de don était déterminé volontairement par la famille du donneur et le receveur était suivi après la transplantation. La famille du donneur et le receveur ont donné leur consentement pour l'utilisation d'échantillons et de données cliniques à des fins de recherche.

Les données sur les donneurs ont été obtenues auprès du China Organ Transplant Response System, complétées par des membres d’organisations de transplantation d’organes. De plus, certaines informations sur les donneurs ont été complétées à partir des dossiers médicaux électroniques cliniques. Les données sur les destinataires provenaient uniquement des dossiers électroniques cliniques. Les enquêteurs ont classé les donneurs et les receveurs en groupes à fonction de greffon retardée (DGF) et à fonction de greffon immédiate (IGF) en fonction de l'état précoce de la fonction rénale du receveur. Le DGF a été défini comme une diminution de la créatinine plasmatique quotidienne de moins de 10 % par rapport à la veille pendant 3 jours consécutifs dans la semaine postopératoire, ou si la créatinine sérique (SCr) n'a pas diminué à 400 μmol/L dans la semaine suivant l'intervention chirurgicale. Les receveurs qui n'ont pas développé de DGF ont été classés dans la catégorie IGF. Un non-fonctionnement primaire (PNF) a été diagnostiqué chez des patients nécessitant une dialyse continue après une intervention chirurgicale ou une retransplantation. De plus, les donneurs critères dépensés ont été définis comme ceux âgés de plus de 60 ans ou entre 50 et 59 ans répondant à au moins deux des critères suivants : créatinine sérique finale > 133 μmol/L, accident vasculaire cérébral comme cause de décès et antécédents de hypertension.

Prélèvement d'échantillons Des échantillons de sang total ont été prélevés auprès du donneur en salle d'opération avant le prélèvement d'organes et transportés sur de la glace pilée jusqu'au laboratoire, avec une durée de transit moyenne de 2 heures. Pour la préparation du sérum, les échantillons de sang total ont été laissés à température ambiante pendant 2 heures, puis centrifugés à 1 000 g pendant 15 minutes à une température de 2 à 8°C. Le surnageant résultant a été collecté et stocké à -80°C au laboratoire. Avant les tests, les échantillons de sérum ont été décongelés sur de la glace pilée et centrifugés à nouveau à 1 000 g pendant 15 minutes à 2-8°C.

La mesure du niveau de protéine de liaison à l'ARN inductible à froid dans le sérum CIRBP a été détectée à l'aide d'un kit ELISA (CSB-EL005440HU). L'étalon protéique a été dilué conformément aux instructions et 100 µl de différentes concentrations d'étalon et d'échantillons (dilution 1:10) ont été ajoutés en double à une plaque à 96 puits. La plaque a été incubée à 37°C pendant 2 heures dans l'obscurité. Après l'incubation, le liquide présent dans les puits a été jeté et 100 µl de solution de travail d'anticorps marqué à la biotine ont été ajoutés à chaque puits. Après incubation à 37°C pendant 1 heure, la plaque a été lavée trois fois avec une solution de lavage. Ensuite, 100 µl de solution d’affinité marquée à la peroxydase de raifort ont été ajoutés à chaque puits. Après une incubation supplémentaire d'une heure à 37°C, la plaque a été lavée cinq fois. Ensuite, 90 µl de solution de substrat ont été ajoutés à chaque puits, et après un développement de couleur de 15 minutes à 37°C, 50 µl de solution de terminaison ont été utilisés pour arrêter la réaction. L'absorbance a été mesurée à 450 nm en 5 minutes à l'aide d'un lecteur de microplaques et les concentrations ont été calculées sur la base de la courbe standard.