A donor CIRBP és a transzplantált vesefunkció közötti összefüggés vizsgálata

A tanulmány egy retrospektív, nyílt kohorszvizsgálat volt, amely 2016 januárja és 2019 decembere között elhunyt betegeket vont be. Az elhunyt szervadományozásra vonatkozó kínai nemzeti program irányelveit követte, és sikeres vesedonorokat vontak be a Szun Jat-szen Egyetem Harmadik Társult Kórházából. A donorokat kizárták, ha megfeleltek az alábbi feltételek valamelyikének: (a) nem vettek vérmintát; b) a CIRBP-szintet befolyásoló szennyezett vérminták voltak; c) olyan recipiensek voltak, akiken kombinált többszerv-átültetésen estek át; d) részt vettek más klinikai vizsgálatokban; e) korábban szervátültetésen esett át; f) egyéb olyan körülményei voltak, amelyeket a vizsgáló alkalmatlannak ítélt a felvételre. A vérmintákat a szervbeszerző szervezetek (OPO) gyűjtötték a donoroktól, és a donorok beleegyezésével különféle vizsgálatokhoz használták fel. A transzplantációt követően minden recipiens (207 recipiens, 207 donor) utánkövetésre került sor.

A nyomozók követték a Helsinki Nyilatkozatban (20) és az Isztambuli Nyilatkozatban felvázolt elveket. A tanulmány jóváhagyását a Szun Jat-szen Egyetem Emberi Szervátültetési és Etikai Bizottsága kapta meg. Az Etikai Bizottság az Egészségügyi Világszervezet (WHO) Működési Irányelvei az Orvosbiológiai Kutatások Etikai Bizottságának felülvizsgálatához című dokumentumának megfelelően alakult. A szervkiosztás tisztességes és átlátható módon történt a kínai szervtranszplantációs válaszrendszeren keresztül. Az adományozás típusát a donor családja önként határozta meg, a recipiens pedig a transzplantációt követően követés alatt állt. A minták és klinikai adatok kutatási felhasználásához mind a donor családja, mind a recipiens hozzájárult.

A donoradatokat a kínai szervtranszplantációs válaszrendszertől szerezték be, amelyet a szervátültetési szervezetek tagjai töltöttek ki. Ezen túlmenően a donorokra vonatkozó információk egy részét kiegészítették a klinikai elektronikus egészségügyi feljegyzésekből. A címzett adatok kizárólag klinikai elektronikus nyilvántartásokból származnak. A kutatók a donorokat és a recipienseket késleltetett graftfunkció (DGF) és azonnali graftfunkció (IGF) csoportokba sorolták a recipiens korai vesefunkciós állapota alapján. A DGF-et a napi plazma kreatininszint 10%-nál kisebb csökkenéseként határozták meg az előző naphoz képest 3 egymást követő napon a műtét utáni 1 héten belül, vagy ha a szérum kreatinin (SCr) nem csökkent 400 μmol/L-re a műtétet követő 1 héten belül. Azokat a recipienseket, akiknél nem alakult ki DGF, IGF kategóriába sorolták. Primer nonfunction (PNF) diagnosztizáltak azoknál a betegeknél, akik műtét vagy retranszplantáció után folyamatos dialízisre szorultak. Ezen túlmenően a kimerült kritériumok szerinti donorok azok a 60 év feletti vagy 50 és 59 év közöttiek, akik megfelelnek legalább kettőnek a következő kritériumok közül: végső szérum kreatinin > 133 μmol/L, agyi érrendszeri baleset mint a halál oka, és a kórelőzmény magas vérnyomás.

Mintavétel Teljes vérmintákat vettünk a donortól a műtőben a szervkivétel előtt, és zúzott jégen szállították a laboratóriumba, átlagosan 2 órás szállítási idővel. A szérumkészítéshez a teljes vérmintákat szobahőmérsékleten 2 órán át hagytuk, majd 1000 g-vel 15 percig centrifugáltuk 2-8°C-on. A kapott felülúszót összegyűjtöttük és -80 °C-on tároltuk a laboratóriumban. A tesztelés előtt a szérummintákat zúzott jégen felengedtük, és ismét centrifugáltuk 1000 g-vel 15 percig 2-8 °C-on.

Hideg indukálható RNS-kötő fehérjeszint mérése szérumban A CIRBP-t ELISA kit (CSB-EL005440HU) segítségével detektáltuk. A fehérje standardot az utasításoknak megfelelően hígítottuk, és 100 µl különböző koncentrációjú standardot és mintákat (1:10 hígítás) adtunk egy 96 lyukú lemezre két párhuzamosban. A lemezt 37 °C-on 2 órán át sötétben inkubáltuk. Az inkubálást követően a lyukakban lévő folyadékot elöntöttük, és 100 µl biotinnal jelölt antitest munkaoldatot adtunk minden egyes lyukba. 37 °C-on 1 órás inkubálás után a lemezt háromszor mostuk mosóoldattal. Ezt követően 100 µl torma-peroxidázzal jelölt affinitásoldatot adtunk minden egyes lyukba. További 1 órás, 37 °C-on végzett inkubálás után a lemezt ötször mostuk. Ezután minden lyukba 90 µl szubsztrát oldatot adtunk, majd 15 perces színfejlődés után 37 °C-on 50 µl terminációs oldatot használtunk a reakció leállítására. Az abszorbanciát 450 nm-en mértük 5 percen belül mikrolemez-leolvasóval, és a koncentrációkat a standard görbe alapján számítottuk ki.