Estudo da correlação entre CIRBP do doador e função renal transplantada

O estudo foi uma coorte retrospectiva aberta que incluiu pacientes falecidos de janeiro de 2016 a dezembro de 2019. Aderiu às diretrizes do Programa Nacional para Doação de Órgãos Falecidos na China e envolveu doadores de rim bem-sucedidos do Terceiro Hospital Afiliado da Universidade Sun Yat-sen. Foram excluídos os doadores que atendessem a alguma das seguintes condições: (a) não tivessem amostra de sangue; (b) tinha amostras de sangue contaminadas que afectavam os níveis de CIRBP; (c) eram receptores submetidos a transplantes combinados de múltiplos órgãos; (d) participavam de outros ensaios clínicos; (e) tinha histórico de transplante de órgãos; (f) apresentavam outras condições consideradas inadequadas para inscrição pelo investigador. Amostras de sangue foram coletadas de doadores por Organizações de Aquisição de Órgãos (OPOs) e utilizadas para vários estudos com o consentimento dos doadores. Todos os receptores (207 receptores, 207 doadores) foram acompanhados a longo prazo após o transplante.

Os investigadores seguiram os princípios delineados na Declaração de Helsínquia (20) e na Declaração de Istambul. A aprovação para este estudo foi obtida do Comitê de Ética e Transplante de Órgãos Humanos da Universidade Sun Yat-sen. O Comitê de Ética foi formado em conformidade com as Diretrizes Operacionais para Revisão do Comitê de Ética em Pesquisa Biomédica da Organização Mundial da Saúde. A alocação de órgãos foi realizada de forma justa e transparente através do Sistema Chinês de Resposta a Transplantes de Órgãos. O tipo de doação foi determinado voluntariamente pela família do doador e o receptor foi acompanhado após o transplante. Tanto a família do doador quanto o receptor consentiram para o uso de amostras e dados clínicos em pesquisas.

Os dados dos doadores foram obtidos do Sistema de Resposta ao Transplante de Órgãos da China, preenchidos por membros de organizações de transplante de órgãos. Além disso, algumas informações dos doadores foram complementadas a partir de registros médicos eletrônicos clínicos. Os dados dos destinatários foram derivados apenas de registros eletrônicos clínicos. Os investigadores categorizaram os doadores e receptores em grupos de função retardada do enxerto (DGF) e função imediata do enxerto (IGF) com base no estado inicial da função renal do receptor. A DGF foi definida como uma diminuição na creatinina plasmática diária inferior a 10% em relação ao dia anterior durante 3 dias consecutivos dentro de 1 semana de pós-operatório, ou se a creatinina sérica (SCr) não diminuiu para 400 μmol/L dentro de 1 semana após a cirurgia. Os receptores que não desenvolveram DGF foram categorizados como IGF. A não função primária (PNF) foi diagnosticada em pacientes que necessitaram de diálise contínua após cirurgia ou retransplante. Além disso, os doadores com critérios gastos foram definidos como aqueles com idade superior a 60 anos ou entre 50 e 59 anos que atendessem a pelo menos dois dos seguintes critérios: creatinina sérica final > 133 μmol/L, acidente vascular cerebral como causa da morte e história de hipertensão.

Coleta de amostras Amostras de sangue total foram obtidas do doador na sala de cirurgia antes da retirada do órgão e transportadas em gelo picado até o laboratório, com duração média de trânsito de 2 horas. Para a preparação do soro, as amostras de sangue total foram deixadas à temperatura ambiente durante 2 horas e depois centrifugadas a 1000 g durante 15 minutos a uma temperatura de 2-8°C. O sobrenadante resultante foi coletado e armazenado a -80°C no laboratório. Antes do teste, as amostras de soro foram descongeladas em gelo picado e centrifugadas novamente a 1000 g por 15 minutos a 2-8°C.

Medição do nível de proteína de ligação de RNA indutível pelo frio A CIRBP sérica foi detectada usando um kit ELISA (CSB-EL005440HU). O padrão proteico foi diluído de acordo com as instruções e 100 µl de diferentes concentrações de padrão e amostras (diluição 1:10) foram adicionados a uma placa de 96 poços em duplicata. A placa foi incubada a 37°C durante 2 horas no escuro. Após a incubação, o líquido nos poços foi descartado e 100 µl de solução de trabalho de anticorpo marcado com biotina foram adicionados a cada poço. Após incubação a 37°C durante 1 hora, a placa foi lavada três vezes com solução de lavagem. Subsequentemente, 100 µl de solução de afinidade marcada com peroxidase de rábano foram adicionados a cada poço. Após mais 1 hora de incubação a 37°C, a placa foi lavada cinco vezes. Em seguida, 90 µl de solução de substrato foram adicionados a cada poço e após 15 minutos de desenvolvimento de cor a 37°C, 50 µl de solução de terminação foram utilizados para interromper a reação. A absorvância foi medida a 450 nm em 5 minutos utilizando um leitor de microplacas e as concentrações foram calculadas com base na curva padrão.