Studie van de correlatie tussen donor-CIRBP en getransplanteerde nierfunctie

Het onderzoek was een retrospectief open cohortonderzoek waarbij overleden patiënten van januari 2016 tot december 2019 betrokken waren. Het volgde de richtlijnen van het Nationale Programma voor Overleden Orgaandonatie in China en er waren succesvolle nierdonoren van het Third Affiliated Hospital van de Sun Yat-sen Universiteit bij betrokken. Donoren werden uitgesloten als ze aan een van de volgende voorwaarden voldeden: (a) er ontbrak een bloedmonster; (b) besmette bloedmonsters hadden die de CIRBP-niveaus beïnvloedden; (c) ontvangers waren die gecombineerde transplantaties van meerdere organen ondergingen; d) deelnamen aan andere klinische onderzoeken; (e) een voorgeschiedenis van orgaantransplantatie had; (f) er waren andere aandoeningen die door de onderzoeker ongeschikt werden geacht voor inschrijving. Bloedmonsters werden verzameld bij donoren door Organ Procurement Organizations (OPO's) en gebruikt voor verschillende onderzoeken met toestemming van de donoren. Alle ontvangers (207 ontvangers, 207 donoren) werden na de transplantatie langdurig gevolgd.

De onderzoekers volgden de principes die zijn uiteengezet in de Verklaring van Helsinki (20) en de Verklaring van Istanbul. Goedkeuring voor deze studie werd verkregen van de Human Organ Transplantation and Ethics Committee van de Sun Yat-sen Universiteit. De Ethische Commissie werd opgericht in overeenstemming met de Operational Guidelines for Ethics Committee Review of Biomedical Research van de Wereldgezondheidsorganisatie. De orgaantoewijzing gebeurde op een eerlijke en transparante manier via het Chinese Organ Transplant Response System. Het type donatie werd vrijwillig bepaald door de familie van de donor en de ontvanger onderging na de transplantatie follow-up. Zowel de familie van de donor als de ontvanger gaven toestemming voor het gebruik van monsters en klinische gegevens in onderzoek.

Donorgegevens zijn verkregen van het China Organ Transplant Response System, aangevuld door leden van orgaantransplantatieorganisaties. Daarnaast werd een deel van de donorinformatie aangevuld vanuit klinische elektronische medische dossiers. Ontvangersgegevens zijn uitsluitend afgeleid van klinische elektronische dossiers. Onderzoekers categoriseerden donoren en ontvangers in groepen met vertraagde transplantaatfunctie (DGF) en onmiddellijke transplantaatfunctie (IGF) op basis van de vroege nierfunctiestatus van de ontvanger. DGF werd gedefinieerd als een afname van het dagelijkse plasmacreatinine van minder dan 10% ten opzichte van de voorgaande dag gedurende 3 opeenvolgende dagen binnen 1 week postoperatief, of als serumcreatinine (SCr) niet binnen 1 week na de operatie daalde tot 400 μmol/l. Ontvangers die geen DGF ontwikkelden, werden gecategoriseerd als IGF. Primaire non-functie (PNF) werd gediagnosticeerd bij patiënten die continue dialyse nodig hadden na een operatie of retransplantatie. Daarnaast werden donoren volgens de criteria gedefinieerd als donoren die ouder zijn dan 60 jaar, of tussen 50 en 59 jaar oud, die aan ten minste twee van de volgende criteria voldoen: uiteindelijk serumcreatinine > 133 μmol/l, cerebrovasculair accident als doodsoorzaak en een voorgeschiedenis van hypertensie.

Monstername Volbloedmonsters werden van de donor in de operatiekamer afgenomen voordat het orgaan werd opgehaald en op gemalen ijs naar het laboratorium getransporteerd, met een gemiddelde transportduur van 2 uur. Voor serumbereiding werden de volbloedmonsters gedurende 2 uur bij kamertemperatuur gelaten en vervolgens gedurende 15 minuten bij 1000 g bij een temperatuur van 2-8°C gecentrifugeerd. Het resulterende supernatant werd verzameld en bij -80°C in het laboratorium bewaard. Vóór het testen werden de serummonsters ontdooid op gemalen ijs en opnieuw 15 minuten bij 1000 g bij 2-8°C gecentrifugeerd.

Meting van koude-induceerbaar RNA-bindend eiwitniveau Serum CIRBP werd gedetecteerd met behulp van een ELISA-kit (CSB-EL005440HU). De eiwitstandaard werd verdund volgens de instructies, en 100 µl van verschillende concentraties standaard en monsters (1:10 verdunning) werd in tweevoud aan een plaat met 96 putjes toegevoegd. De plaat werd gedurende 2 uur in het donker bij 37°C geïncubeerd. Na de incubatie werd de vloeistof in de putjes weggegooid en werd 100 µl van met biotine gemerkte antilichaamwerkoplossing aan elk putje toegevoegd. Na 1 uur incuberen bij 37°C werd de plaat driemaal gewassen met wasoplossing. Vervolgens werd aan elk putje 100 µl met mierikswortelperoxidase gemerkte affiniteitsoplossing toegevoegd. Na nog eens 1 uur incubatie bij 37°C werd de plaat vijf keer gewassen. Vervolgens werd aan elk putje 90 µl substraatoplossing toegevoegd en na een kleurontwikkeling van 15 minuten bij 37°C werd 50 µl terminatieoplossing gebruikt om de reactie te stoppen. De absorptie werd binnen 5 minuten gemeten bij 450 nm met behulp van een microplaatlezer, en de concentraties werden berekend op basis van de standaardcurve.