Studie av korrelasjonen mellom donor CIRBP og transplantert nyrefunksjon

Studien var en retrospektiv åpen kohortstudie som inkluderte avdøde pasienter fra januar 2016 til desember 2019. Den fulgte retningslinjene for det nasjonale programmet for avdøde organdonasjoner i Kina og involverte vellykkede nyredonorer fra det tredje tilknyttede sykehuset ved Sun Yat-sen University. Donorer ble ekskludert hvis de oppfylte noen av følgende betingelser: (a) manglet en blodprøve; (b) hadde kontaminerte blodprøver som påvirket CIRBP-nivåer; (c) var mottakere som gjennomgikk kombinerte multiorgantransplantasjoner; (d) deltok i andre kliniske studier; (e) hadde en historie med organtransplantasjon; (f) hadde andre forhold ansett som uegnet for registrering av etterforskeren. Blodprøver ble tatt fra givere av Organ Procurement Organizations (OPOs) og brukt til ulike studier med givernes samtykke. Alle mottakere (207 mottakere, 207 givere) ble fulgt opp på lang sikt etter transplantasjon.

Etterforskerne fulgte prinsippene skissert i Helsinki-erklæringen (20) og Istanbul-erklæringen. Godkjenning for denne studien ble oppnådd fra Human Organ Transplantation and Ethics Committee ved Sun Yat-sen University. Etikkkomiteen ble dannet i samsvar med Verdens helseorganisasjons operasjonelle retningslinjer for gjennomgang av biomedisinsk forskning. Organtildeling ble utført på en rettferdig og transparent måte via det kinesiske organtransplantasjonsresponssystemet. Type donasjon ble frivillig bestemt av donors familie, og mottakeren gjennomgikk oppfølging etter transplantasjon. Både donors familie og mottaker ga samtykke til bruk av prøver og kliniske data i forskning.

Donordata ble hentet fra China Organ Transplant Response System, utfylt av medlemmer av organtransplantasjonsorganisasjoner. I tillegg ble noe donorinformasjon supplert fra kliniske elektroniske journaler. Mottakerdata ble hentet fra kliniske elektroniske journaler alene. Etterforskere kategoriserte givere og mottakere i grupper med forsinket graftfunksjon (DGF) og umiddelbart graftfunksjon (IGF) basert på mottakerens tidlige nyrefunksjonsstatus. DGF ble definert som en reduksjon i daglig plasmakreatinin på mindre enn 10 % fra dagen før i 3 påfølgende dager innen 1 uke postoperativt, eller hvis serumkreatinin (SCr) ikke sank til 400 μmol/L innen 1 uke etter operasjonen. Mottakere som ikke utviklet DGF ble kategorisert som IGF. Primær ikke-funksjon (PNF) ble diagnostisert hos pasienter som trengte kontinuerlig dialyse etter operasjon eller retransplantasjon. I tillegg ble donorer definert som de i alderen over 60 år, eller mellom 50 og 59 år som oppfyller minst to av følgende kriterier: endelig serumkreatinin > 133 μmol/L, cerebrovaskulær ulykke som dødsårsak og en historie med hypertensjon.

Prøvetaking Fullblodsprøver ble tatt fra giveren i operasjonssalen før organuthenting og transportert på knust is til laboratoriet, med en gjennomsnittlig transittvarighet på 2 timer. For serumpreparering ble helblodsprøvene stående i romtemperatur i 2 timer, deretter sentrifugert ved 1000 g i 15 minutter ved en temperatur på 2-8°C. Den resulterende supernatanten ble samlet og lagret ved -80°C i laboratoriet. Før testing ble serumprøvene tint på knust is og sentrifugert igjen ved 1000 g i 15 minutter ved 2-8°C.

Måling av kaldt induserbart RNA-bindende proteinnivå serum CIRBP ble påvist ved bruk av et ELISA-sett (CSB-EL005440HU). Proteinstandarden ble fortynnet i henhold til instruksjonene, og 100 µl forskjellige konsentrasjoner av standard og prøver (1:10 fortynning) ble tilsatt til en 96-brønners plate i duplikat. Platen ble inkubert ved 37°C i 2 timer i mørket. Etter inkubering ble væsken i brønnene kastet, og 100 ul av biotinmerket antistoffarbeidsløsning ble tilsatt til hver brønn. Etter inkubering ved 37°C i 1 time, ble platen vasket tre ganger med vaskeløsning. Deretter ble 100 ul pepperrotperoksidase-merket affinitetsløsning tilsatt til hver brønn. Etter ytterligere 1 times inkubering ved 37°C ble platen vasket fem ganger. Deretter ble 90 ul substratløsning tilsatt til hver brønn, og etter en 15-minutters fargeutvikling ved 37°C ble 50 ul termineringsløsning brukt for å stoppe reaksjonen. Absorbansen ble målt ved 450 nm innen 5 minutter ved bruk av en mikroplateleser, og konsentrasjonene ble beregnet basert på standardkurven.