Untersuchung der Korrelation zwischen Spender-CIRBP und transplantierter Nierenfunktion

Bei der Studie handelte es sich um eine retrospektive offene Kohortenstudie, die zwischen Januar 2016 und Dezember 2019 verstorbene Patienten umfasste. Es hielt sich an die Richtlinien des Nationalen Programms zur Organspende von Verstorbenen in China und beteiligte erfolgreiche Nierenspender aus dem dritten angegliederten Krankenhaus der Sun Yat-sen-Universität. Spender wurden ausgeschlossen, wenn sie eine der folgenden Bedingungen erfüllten: (a) keine Blutprobe vorhanden war; (b) kontaminierte Blutproben hatten, die die CIRBP-Werte beeinflussten; (c) Empfänger waren, die sich einer kombinierten Multiorgantransplantation unterzogen hatten; (d) an anderen klinischen Studien teilgenommen haben; (e) eine Vorgeschichte von Organtransplantationen hatte; (f) andere Bedingungen aufwiesen, die der Prüfer für die Einschreibung als ungeeignet erachtete. Blutproben wurden von Organbeschaffungsorganisationen (OPOs) von Spendern entnommen und mit Zustimmung der Spender für verschiedene Studien verwendet. Alle Empfänger (207 Empfänger, 207 Spender) wurden nach der Transplantation langfristig nachbeobachtet.

Die Ermittler folgten den Grundsätzen der Deklaration von Helsinki (20) und der Deklaration von Istanbul. Die Genehmigung für diese Studie wurde von der Kommission für Organtransplantation und Ethik der Sun Yat-sen-Universität eingeholt. Die Ethikkommission wurde in Übereinstimmung mit den operativen Richtlinien der Weltgesundheitsorganisation für die Überprüfung der biomedizinischen Forschung durch die Ethikkommission gebildet. Die Organzuteilung erfolgte auf faire und transparente Weise über das chinesische Organtransplantations-Reaktionssystem. Die Art der Spende wurde von der Familie des Spenders freiwillig festgelegt und der Empfänger wurde nach der Transplantation einer Nachsorge unterzogen. Sowohl die Familie des Spenders als auch der Empfänger stimmten der Verwendung von Proben und klinischen Daten in der Forschung zu.

Die Spenderdaten wurden vom China Organ Transplant Response System bezogen und von Mitgliedern von Organtransplantationsorganisationen vervollständigt. Darüber hinaus wurden einige Spenderinformationen aus klinischen elektronischen Krankenakten ergänzt. Die Empfängerdaten wurden ausschließlich aus klinischen elektronischen Aufzeichnungen abgeleitet. Die Forscher teilten Spender und Empfänger anhand des frühen Nierenfunktionsstatus des Empfängers in Gruppen mit verzögerter Transplantatfunktion (DGF) und sofortiger Transplantatfunktion (IGF) ein. DGF wurde definiert als eine Abnahme des täglichen Plasmakreatinins um weniger als 10 % gegenüber dem Vortag an drei aufeinanderfolgenden Tagen innerhalb einer Woche nach der Operation oder wenn das Serumkreatinin (SCr) innerhalb einer Woche nach der Operation nicht auf 400 μmol/l abfiel. Empfänger, die kein DGF entwickelten, wurden als IGF kategorisiert. Bei Patienten, die nach einer Operation oder Retransplantation eine kontinuierliche Dialyse benötigten, wurde eine primäre Funktionsstörung (PNF) diagnostiziert. Darüber hinaus wurden als Spender nach verbrauchten Kriterien diejenigen definiert, die älter als 60 Jahre oder zwischen 50 und 59 Jahre alt waren und mindestens zwei der folgenden Kriterien erfüllten: endgültiges Serumkreatinin > 133 μmol/l, zerebrovaskulärer Unfall als Todesursache und eine Vorgeschichte von Hypertonie.

Probenentnahme Vor der Organentnahme wurden dem Spender im Operationssaal Vollblutproben entnommen und auf zerstoßenem Eis mit einer durchschnittlichen Transportdauer von 2 Stunden ins Labor transportiert. Zur Serumvorbereitung wurden die Vollblutproben 2 Stunden lang bei Raumtemperatur belassen und dann 15 Minuten lang bei 1000 g und einer Temperatur von 2–8 °C zentrifugiert. Der resultierende Überstand wurde gesammelt und im Labor bei -80 °C gelagert. Vor dem Test wurden die Serumproben auf zerstoßenem Eis aufgetaut und erneut bei 1000 g für 15 Minuten bei 2–8 °C zentrifugiert.

Messung des Gehalts an kälteinduzierbarem RNA-Bindungsprotein im Serum CIRBP wurde mit einem ELISA-Kit (CSB-EL005440HU) nachgewiesen. Der Proteinstandard wurde gemäß den Anweisungen verdünnt und 100 µl unterschiedlicher Konzentrationen von Standard und Proben (1:10-Verdünnung) wurden in zweifacher Ausfertigung in eine 96-Well-Platte gegeben. Die Platte wurde 2 Stunden lang im Dunkeln bei 37°C inkubiert. Nach der Inkubation wurde die Flüssigkeit in den Vertiefungen verworfen und 100 µl Biotin-markierte Antikörper-Arbeitslösung in jede Vertiefung gegeben. Nach einstündiger Inkubation bei 37 °C wurde die Platte dreimal mit Waschlösung gewaschen. Anschließend wurden 100 µl Meerrettichperoxidase-markierte Affinitätslösung in jede Vertiefung gegeben. Nach einer weiteren einstündigen Inkubation bei 37 °C wurde die Platte fünfmal gewaschen. Dann wurden 90 µl Substratlösung in jede Vertiefung gegeben und nach einer 15-minütigen Farbentwicklung bei 37 °C wurden 50 µl Terminationslösung verwendet, um die Reaktion zu stoppen. Die Absorption wurde bei 450 nm innerhalb von 5 Minuten mit einem Mikroplatten-Lesegerät gemessen und die Konzentrationen wurden anhand der Standardkurve berechnet.