使用吡维铵逆转胃癌前期病症

目标：

该研究的主要目的是获得关于使用吡维铵在患有胃肠化生和/或不典型增生的人类参与者中恢复完全肠化生或正常胃粘膜的有效性和安全性的更多数据。 次要目标是评估吡维铵治疗对源自化生和/或不典型增生患者的人类癌前胃的有效性，确定吡维铵治疗对异质癌前细胞的靶向作用，定义吡维铵抗癌作用的功能机制药物，确定吡维铵对与 GC 风险预测相关的血清生物标志物水平的影响，并研究吡维铵对胃微生物组的影响。

研究设计：

这是一项 2 期随机临床试验，旨在招募 50 名患有广泛/明显肠化 (IM) 和/或发育不良的参与者。 入组后，使用改良的剑桥方案进行基线食管胃十二指肠镜检查（OGD），以确保足够的采样。 由于大多数参与者将在基线确认其组织学之前被招募，因此如果在基线时检测到一些参与者没有 IM、没有广泛/明显的 IM 或没有发育不良，他们将退出研究。 50 名有广泛/明显胃部 IM 和/或发育不良证据的参与者将每天以 1:1 的随机比例口服吡维铵（2mg/kg/天）或安慰剂，持续 14 天。 参与者将在诊所或通过电话接受随访，以监测治疗第 14 天的症状。 参与者将保持盲态，研究团队将分为盲态和非盲态团队。 在试验的活跃阶段，只有非盲团队才能接触到暴露（吡维铵与安慰剂）。 随机分组后，诊所将总共进行 3 次随访研究访问，为期一年（自治疗最后一天起）。

基线：

参与者将接受基线 OGD 和活检以确定 IM 和发育不良状态。 胃粘膜活检将按如下方式收集：

• AL、AG、IA、BL、BG、PP 各 1 份活检并送去组织学检查
• BL 处的 3 个相邻活组织检查、IA 处的 1 个活组织检查、AL 处的 5 个相邻活组织检查、AG 处的 1 个活组织检查以及 PP 处的 2 个相邻活组织检查将在液氮中速冻

位置定义如下：

• AL——胃窦小弯，距幽门2-3cm以内
• AG——胃窦大弯，距幽门2-3cm以内
• IA-- 角切迹
• BL - 主体小曲度，距角近端 4 厘米
• BG——体大弯中部，距贲门8cm
• PP-- 幽门前部

如果有机会，将采集胃液并测量胃 pH 值。 已知胃 IM 区域的 4 个活组织检查将用于生成胃类器官。 具有广泛/明显胃部 IM 和/或发育不良证据的参与者将被随机分配至吡维铵治疗组或安慰剂治疗组。 将在入组时收集临床数据，包括合并症、药物使用、幽门螺杆菌检测和治疗史、家族史、烟草和酒精暴露、内窥镜数据和病理学/组织学结果。

最初的 IM 病变区域是通过靶向 EGGIM II 来定位的，这与广泛的 IM 密切相关。 先用 HD-WLE 观察胃粘膜，然后用 HD-NBI 观察。 OGD 程序将被记录以供验证之用。 OGD 期间发现的所有粘膜病变将作为正常临床实践的一部分单独进行活检，并送去进行组织病理学评估。 冷冻活检样本将储存在高质量组织库中。 调查人员将遵循上述协议。 然而，如果患者的利益需要，他们可能会偏离协议。

组织学评估：

对于组织学评估，活组织检查将进行 H&E 以及 PAS/Alcian 蓝染色。 此外，还将对正常胃谱系、化生（SPEM 和 IM）和不典型增生的标志物进行免疫染色。 将通过数字成像和定量评估活检中的标记表达。

食物频率问卷（FFQ）：

参与者将被要求在粪便样本采集后 4 周内的基线访视时完成一次 FFQ。

后续：

吡维铵组和安慰剂组都将接受相同的后续程序。 将在每次后续监测 OGD 时收集粘膜活检，具体如下：

• AL、AG、IA、BL、BG、PP 各 1 份活检并送去组织学检查
• BL 处的 2 个相邻活检组织、AL 处的 4 个相邻活检组织和 PP 处的 2 个相邻活检组织将在液氮中速冻

每次后续内窥镜检查最多将进行 14 次研究活检。 EGGIM 分数将被记录。 先用 HD-WLE 观察胃粘膜，然后用 HD-NBI 观察。 OGD 程序将被记录以供验证之用。 OGD 期间发现的所有粘膜病变将作为正常临床实践的一部分单独进行活检，并送去进行组织病理学评估。 冷冻活检样本将储存在高质量组织库中。 调查人员将遵循上述协议。 然而，如果患者的利益需要，他们可能会偏离协议。

后续监测 OGD 将在治疗第 7 天、治疗后 6 周和治疗后 1 年进行。 治疗第 7 天监测 OGD 的窗口期为 ± 2 天，治疗后 6 周和 1 年监测 OGD 的窗口期为 ± 2 周。

在治疗的最后一天（第 14 天），将通过诊所或电话随访来监测症状。 已知的罕见副作用包括皮疹、阳光敏感、腹泻、恶心/呕吐、胃痉挛，所有受试者都会监测这些症状和其他症状。

血液采集、处理和分析：

将在以下每个时间点从每位参与者身上抽取最多 20 毫升血液：基线、治疗第 7 天、治疗后 6 周和治疗后 1 年。 将提取血清、血浆和血沉棕黄层。

胃液、唾液和粪便收集：

每次研究内窥镜检查时，即基线、治疗第 7 天、治疗后 6 周和治疗后 1 年，将采集胃液并测量胃 pH 值。 还将在以下时间点从研究内窥镜检查的参与者处获取唾液和粪便，以进行微生物组研究：基线、治疗后 6 周和治疗后 1 年。

人类癌前类器官：

研究人员将使用来自二期临床试验招募的患者的人体类器官进行生物学研究，目的是确定吡维铵治疗对异质癌前细胞的靶向作用，并确定吡维铵作为抗癌药物的作用机制。

血清生物标志物分析：

分离血清中的总 RNA 并将其转化为 cDNA，然后进行定量。 分析技术和生物学变异标准化后的目标 miRNA 表达水平，以确定在健康和疾病状态之间具有最高区分能力的 miRNA 组。

微生物群分析：

组织、胃液、唾液和粪便将接受下一代宏基因组测序和定向培养组学，以研究 IM 进展/消退中微生物与宿主的相互作用。

单细胞分析：

将组织放入冷的组织储存溶液中，并使用酶消化解离成单细胞，并进行台盼蓝染色以确定细胞活力。 解离的细胞随后将用于各种单细胞平台，如scRNA-seq、scDNA-seq、scATAC-seq、单细胞免疫分析和其他单细胞相关技术（伴随深入的综合计算数据分析）以确定相应的生物测量。 除此之外，组织还可以用于多种基因组平台（例如。 外显子组测序和低通测序等）和免疫组织学平台。

样本量计算：

需要 48 名参与者（每组 24 名）的样本量来检测治疗组（吡维铵）和对照组（安慰剂）之间胃肠化生减少（主要终点）的参与者比例差异 30%，以实现假设接近 0% 的参与者胃肠化生有任何减少，则在 20% 的单侧 I 型错误率下，功效为 80%，潜在的退出率为 20%。 该研究设计被称为 II 期筛选试验设计，有 80% 的机会检测到治疗确实有效，如果研究结果对治疗有利，则值得在 III 期试验中进一步研究。 招募目标已从48名参与者上调至50名参与者。

统计分析：

(一) 一般考虑

研究人员假设，与对照安慰剂相比，吡维铵（口服 2mg/kg/天，持续 14 天）将导致胃部 IM 绝对减少 50%，因此我们的晚期胃部 IM 患者平均有 75.6% +/- 8.4%（ SD) 活检中存在 IM，而轻度胃 IM 患者的胃活检中存在平均 14% +/- 8.2%(SD) IM。

将使用描述性统计来总结连续变量，包括平均值、中位数、Q1 和 Q3、最小值和最大值以及标准差。 将使用百分比和频率来总结分类变量。 所有置信区间均为 95%。

(二)功效分析

所有疗效分析都将根据意向治疗人群进行。 将分别计算治疗组和安慰剂组的主要终点，即胃肠化生减少（和/或发育不良恢复为完全肠化生或正常胃粘膜）的患者百分比。 百分比差异将与 95% 精确置信区间一起呈现。 考虑到该研究的探索性质，不会报告 p 值。 具有二元结果的次要终点将与主要终点类似地进行分析。 次要连续终点将表示为后续时间点相对于基线的平均变化。 各组之间平均值的差异将在每个随访时间点连同其 95% 置信区间一起呈现。

(C) 安全性分析

所有安全性分析都将根据治疗人群进行。 将使用计数和百分比来呈现不良事件和严重不良事件，以及经历每种类型的不良事件和严重不良事件的受试者的数量以及它们与组的关系和严重性。 实验室结果将显示每个评估时间点的平均值以及每组异常和临床显着结果的百分比。

(D) 中期分析

没有计划进行正式的中期分析。 然而，首席研究员将定期以盲法监测安全数据。 由 NUH 内窥镜中心主任、NUH 胃肠病学和肝病科主任以及 NUH 胃肠病学和肝病科安全负责人组成的委员会将定期监测安全数据。