Pirvinium használata a gyomor rákmegelőző állapotainak visszafordítására

Célok:

A vizsgálat fő célja további adatok beszerzése a pirvinium alkalmazásának hatékonyságáról és biztonságosságáról gyomorbél-metaplasiában és/vagy diszpláziában szenvedő humán résztvevők esetében a teljes bél-metaplasia vagy a normál gyomornyálkahártya helyreállítása érdekében. A másodlagos célkitűzések a pirvinium kezelés hatékonyságának értékelése metaplasiás és/vagy diszpláziás betegekből származó humán rák előtti gyomorban, a pirvinium kezelés célzott hatásainak meghatározása heterogén rákmegelőző sejtekben, a pirvinium, mint rákellenes hatás funkcionális mechanizmusainak meghatározása. gyógyszer, meghatározza a pirvinium hatását a szérum biomarkerek szintjére a GC kockázat előrejelzésével kapcsolatban, és megvizsgálja a pirvinium hatását a gyomor mikrobiomája.

Tanulmánytervezés:

Ez egy 2. fázisú randomizált klinikai vizsgálat, amelynek célja 50 résztvevő bevonása kiterjedt/markáns intestinalis metaplasiában (IM) és/vagy diszpláziában. A beiratkozást követően a megfelelő mintavétel biztosítása érdekében egy módosított Cambridge-i protokollt használó kiindulási oesophagogastroduodenoscopiát (OGD) végeznek. Mivel a legtöbb résztvevőt a szövettani vizsgálat megkezdése előtt toborozzák, néhány résztvevőt kivonnak a vizsgálatból, ha azt észlelik, hogy nincs IM, nincs kiterjedt/kifejezett IM vagy nincs diszplázia az alapvonalon. 50 résztvevő, akiknél kiterjedt/kifejezett gyomor-impulzus és/vagy diszplázia van, pirviniumot (2 mg/ttkg/nap) vagy placebót kapnak orálisan 1:1 randomizálási arányban naponta 14 napon keresztül. A betegeket a klinikán vagy telefonon követik nyomon a tünetek megfigyelése érdekében a kezelés 14. napján. A résztvevők vakok maradnak, és a tanulmányozó csapat vak és nem vak csapatokra oszlik. Csak a nem vak csoport férhet hozzá az expozícióhoz (pirvinium kontra placebo) a vizsgálat aktív szakaszában. Összesen 3 nyomon követési vizsgálatra kerül sor a klinikán a randomizációt követően, a kezelés utolsó napját követő legfeljebb egy évig.

Alapállapot:

A résztvevők OGD-n és biopszián esnek át az IM és a dysplasia állapotának megállapítására. A gyomornyálkahártya biopsziáját a következőképpen gyűjtik:

• 1-1 biopszia AL, AG, IA, BL, BG, PP és szövettani vizsgálatra küldve
• 3 szomszédos biopszia BL-ben, 1 biopszia IA-ban, 5 szomszédos biopszia AL-ban, 1 biopszia AG-ban és 2 szomszédos biopszia PP-ben gyorsfagyasztva lesz folyékony nitrogénben

A helyszínek meghatározása a következő:

• AL - az antrum kisebb görbülete, a pylorustól 2-3 cm-en belül
• AG - az antrum nagyobb görbülete, a pylorustól 2-3 cm-en belül
• IA - incisura angularis
• BL - a corpus kisebb görbülete, az angulustól 4 cm-re
• BG - a corpus nagyobb görbületének középső része, 8 cm-re a cardiától
• PP - prepylorus

Ha van rá lehetőség, gyomornedv fogyasztásra kerül sor, és megmérik a gyomor pH-ját. Az ismert gyomor IM területeinek 4 biopsziáját használják fel a gyomor organoidok előállítására. Azokat a résztvevőket, akiknél kiterjedt/markáns gyomor IM és/vagy diszplázia jele van, ezt követően véletlenszerűen besorolják a pirvinium- vagy placebo-kezelési ágba. A beiratkozáskor gyűjtik a klinikai adatokat, beleértve a társbetegségeket, a gyógyszerhasználatot, a H. pylori vizsgálati és kezelési előzményeket, a családi anamnézist, a dohány- és alkoholexpozíciót, az endoszkópos adatokat és a patológiai/szövettani eredményeket.

A kezdeti IM lézió területét az EGGIM II megcélzásával lehet lokalizálni, ami jól korrelál a kiterjedt IM-vel. A gyomornyálkahártyát HD-WLE-vel, majd HD-NBI-val figyelték meg. Az OGD eljárást ellenőrzés céljából rögzítjük. Az OGD során azonosított összes nyálkahártya-léziót a normál klinikai gyakorlat részeként külön biopsziával veszik, és kórszövettani értékelésre küldik. A fagyasztott biopsziás mintákat jó minőségű szövetbankban tárolják. A nyomozók a fenti protokollt követik. A protokolltól azonban eltérhetnek, ha a beteg érdekei ezt kívánják.

Szövettani értékelés:

Szövettani értékeléshez a biopsziákat H&E-re, valamint PAS/Alcian kékre festik. Ezenkívül immunfestést végeznek a normál gyomorvonal, a metaplázia (SPEM és IM) és a dysplasia markereire. A biopsziákban a marker expresszióját digitális képalkotással és mennyiségi meghatározással értékeljük.

Étkezési gyakorisági kérdőív (FFQ):

A résztvevőket felkérik, hogy a kiindulási vizit alkalmával egyszer töltsenek ki egy FFQ-t, a székletminta vételétől számított 4 héten belül.

Nyomon követés:

Mind a pirvinium-, mind a placebo-csoportok ugyanazon a nyomon követési eljárásokon esnek át. A nyálkahártya-biopsziát minden egyes utóellenőrzési OGD-n gyűjtik az alábbiak szerint:

• 1-1 biopszia AL, AG, IA, BL, BG, PP és szövettani vizsgálatra küldve
• 2 szomszédos biopsziát BL-ben, 4 szomszédos biopsziát AL-ban és 2 szomszédos biopsziát PP-ben gyorsfagyasztva folyékony nitrogénben

Maximum 14 kutatási biopsziát vesznek az egyes nyomon követési endoszkópiák során. Az EGGIM pontszám rögzítésre kerül. A gyomornyálkahártyát HD-WLE-vel, majd HD-NBI-val figyelték meg. Az OGD eljárást ellenőrzés céljából rögzítjük. Az OGD során azonosított összes nyálkahártya-léziót a normál klinikai gyakorlat részeként külön biopsziával veszik, és kórszövettani értékelésre küldik. A fagyasztott biopsziás mintákat jó minőségű szövetbankban tárolják. A nyomozók a fenti protokollt követik. A protokolltól azonban eltérhetnek, ha a beteg érdekei ezt kívánják.

Az OGD nyomon követése a kezelés 7. napján, 6 héttel a kezelés után és 1 évvel a kezelés után történik. Egy ± 2 napos ablakperiódus a felügyeleti OGD esetében a kezelés 7. napján, és ± 2 hét a felügyeleti OGD esetében a 6. héten és 1 éves kezelés után.

A tüneteket a kezelés utolsó napján (14. nap) a klinikán vagy telefonon követik nyomon. Az ismert ritka mellékhatások közé tartozik a bőrkiütés, napérzékenység, hasmenés, hányinger/hányás, gyomorgörcs, és ezeket és más tüneteket minden alanynál ellenőrizni fogják.

Vérvétel, feldolgozás és elemzések:

Legfeljebb 20 ml vért vesznek le minden résztvevőtől a következő időpontok mindegyikében: kiindulási állapot, a kezelés 7. napja, 6 héttel a kezelés után és 1 évvel a kezelés után. A szérum, a plazma és a buffy coat kivonásra kerül.

Gyomorlé-, nyál- és székletgyűjtemény:

Gyomornedvet vesznek, és a gyomor pH-ját megmérik minden egyes kutatási endoszkópiánál, azaz az alapértéket, a kezelés 7. napján, 6 héttel a kezelés után és 1 évvel a kezelés után. A nyálat és a székletet a mikrobiomvizsgálatok során végzett kutatási endoszkópia résztvevőitől is nyerik a következő időpontokban: kiindulási állapot, 6 héttel a kezelés után és 1 évvel a kezelés után.

Emberi rák előtti organoidok:

A kutatók biológiai vizsgálatokat végeznek a 2. fázisú klinikai vizsgálatba toborzott betegekből származó humán organoidok felhasználásával, azzal a céllal, hogy meghatározzák a pirvinium-kezelés célzott hatásait heterogén rákmegelőző sejtekben, és meghatározzák a pirvinium, mint rákellenes gyógyszer hatásmechanizmusait.

Szérum biomarker profilozás:

A szérumból származó teljes RNS-t izoláljuk és cDNS-vé alakítjuk, amelyet ezután mennyiségileg meghatározunk. Mind a technikai, mind a biológiai variációk normalizálása után elemezzük a cél miRNS expressziós szinteket, hogy azonosítsuk azokat a miRNS-eket, amelyek a legnagyobb megkülönböztető erővel rendelkeznek az egészséges és a beteg állapotok között.

Mikrobióta elemzések:

A szövetek, a gyomornedv, a nyál és a széklet következő generációs metagenomikus szekvenáláson és irányított kulturomikán mennek keresztül, hogy tanulmányozzák a mikroba-gazdaszervezet kölcsönhatásokat az IM progressziójában/regressziójában.

Egysejtes elemzés:

A szöveteket hideg szövettároló oldatba helyezzük, és enzimatikus emésztéssel egyes sejtekké disszociálják, és tripánkék festést végeznek a sejtek életképességének meghatározására. A disszociált sejteket ezután különféle egysejt-platformokhoz, például scRNA-seq-hez, scDNA-seq-hez, scATAC-seq-hez, egysejtes immunprofil-készítéshez és más, egysejttel kapcsolatos technológiákhoz (mélyreható integráló számítási adatelemzéssel kísérve) használják fel, hogy meghatározzák. a megfelelő biológiai méréseket. Ezen túlmenően a szövetek számos genomiális platformhoz is felhasználhatók (pl. exome szekvenálás és aluláteresztő szekvenálás stb.) és immunhisztológiai platformok.

A minta méretének kiszámítása:

48 résztvevős (csoportonként 24 fős) mintára lesz szükség ahhoz, hogy 30%-os különbséget észleljünk azon résztvevők arányában, akiknél csökkent a gyomorbél metaplázia (elsődleges végpont) a kezelési (Pyrvinium) és a kontroll (Placebo) csoportok között. 80%-os teljesítmény 20%-os egyoldali I. típusú hibaarány mellett, feltételezve, hogy a résztvevők közel 0%-a csökkenti a gyomorbél metapláziáját, és 20%-os potenciális lemorzsolódás. A vizsgálati tervet Phase II Screening Trial Design néven emlegetik, amely 80%-os eséllyel kimutatja, hogy a kezelés valóban hatékony, és érdemes tovább vizsgálni egy Fázis III-as vizsgálat során, ha a vizsgálat eredménye kedvező a kezelés számára. A toborzási célt 48-ról 50 főre kerekítették.

Statisztikai elemzés:

(A) Általános megfontolások

A kutatók azt feltételezik, hogy a pirvinium (szájon át 2 mg/ttkg/nap 14 napon keresztül) a kontroll placebóhoz képest abszolút 50%-kal csökkenti a gyomor IM-et, miközben előrehaladott gyomor IM betegeink átlagosan 75,6% +/- 8,4% ( SD) IM jelenléte a biopsziáikban, összehasonlítva az enyhe gyomorban szenvedő betegekkel, átlagosan 14% +/- 8,2%(SD) IM jelenléte a gyomorbiopsziáikban.

A folyamatos változókat leíró statisztikák segítségével összegzik, beleértve az átlagokat, mediánokat, Q1-et és Q3-at, minimumot és maximumot, valamint szórásokat. A kategorikus változókat százalékok és gyakoriságok segítségével összegzik. Minden konfidenciaintervallum 95%.

(B) Hatékonysági elemzések

Minden hatékonysági elemzést a kezelni szándékozott populáció alapján kell elvégezni. A gyomor-bél metapláziában (és/vagy a teljes bél-metapláziává vagy normál gyomornyálkahártyává való visszatéréshez szükséges diszpláziában) szenvedő betegek százalékos arányának elsődleges végpontját a kezelési és a placebo-csoportban külön számítják ki. A százalékos különbség a 95%-os pontos konfidenciaintervallummal együtt jelenik meg. A vizsgálat feltáró jellegére tekintettel p-értékeket nem közölnek. A bináris kimenetelű másodlagos végpontokat az elsődleges végponthoz hasonlóan elemzik. A másodlagos folytonos végpontok az alapvonalhoz viszonyított átlagos változásként jelennek meg a követési időpontokban. A csoportok közötti átlagértékek különbségét minden egyes követési időpontban bemutatjuk a 95%-os konfidencia intervallumokkal együtt.

(C) Biztonsági elemzések

Az összes biztonsági elemzés a kezelt populáció alapján kerül bemutatásra. A nemkívánatos és súlyos nemkívánatos eseményeket az egyes típusú nemkívánatos eseményeket és súlyos nemkívánatos eseményeket tapasztaló alanyok számával, valamint a csoporttal való kapcsolatukkal és súlyosságukkal mutatjuk be számok és százalékok segítségével. A laboratóriumi eredményeket az egyes értékelési időpontok átlagértékeivel együtt mutatják be, valamint az abnormális és klinikailag szignifikáns eredmények százalékos arányát az egyes csoportokban.

(D) Időközi elemzések

Hivatalos időközi elemzést nem terveznek. A vizsgálatvezető azonban rendszeres időközönként vakon ellenőrzi a biztonsági adatokat. A biztonsági adatokat az NUH Endoszkópiai Központ igazgatójából, az NUH Gasztroenterológiai és Hepatológiai Osztályvezetőjéből és az NUH Gasztroenterológiai és Hepatológiai Osztályának biztonsági vezetőjéből álló bizottság rendszeres időközönként figyelemmel kísérné.