Использование пирвиния для устранения предраковых состояний желудка

Цели:

Основные цели исследования — получить дополнительные данные об эффективности и безопасности применения пирвиния у людей с желудочно-кишечной метаплазией и/или дисплазией для реверсии к полной кишечной метаплазии или нормальной слизистой оболочке желудка. Вторичные цели заключаются в том, чтобы оценить эффективность лечения пирвинием у людей с предраковыми гастроидами, полученными от пациентов с метаплазией и/или дисплазией, определить целевые эффекты лечения пирвинием в гетерогенных предраковых клетках, определить функциональные механизмы действия пирвиния как противоракового средства. препарата, определить влияние пирвиния на уровень сывороточных биомаркеров, связанных с прогнозированием риска РХ, и изучить влияние пирвиния на микробиом желудка.

Дизайн исследования:

Это рандомизированное клиническое исследование второй фазы, целью которого является набор 50 участников с обширной/выраженной кишечной метаплазией (ИМ) и/или дисплазией. После включения в исследование проводится базовая эзофагогастродуоденоскопия (ОГД) с использованием модифицированного Кембриджского протокола для обеспечения адекватного отбора проб. Поскольку большинство участников будут набраны до подтверждения их гистологии на исходном уровне, некоторые участники будут исключены из исследования, если у них будет обнаружено отсутствие ИМ, обширное/выраженное ИМ или дисплазия на исходном уровне. 50 участников с признаками обширного/выраженного ИМ желудка и/или дисплазии будут получать пирвиний (2 мг/кг/день) или плацебо перорально в соотношении рандомизации 1:1 ежедневно в течение 14 дней. За участниками будут наблюдать в клинике или по телефону для мониторинга симптомов на 14-й день лечения. Участники останутся слепыми, а исследовательская группа будет разделена на слепые и неслепые команды. Только неослепленная команда будет иметь доступ к воздействию (пирвиний против плацебо) во время активной фазы исследования. Всего после рандомизации в клинику будет проведено 3 контрольных визита в течение года после последнего дня лечения.

Базовый уровень:

Участники пройдут базовое ОГД и биопсию, чтобы определить статус ИМ и дисплазии. Биопсия слизистой оболочки желудка собирается следующим образом:

• По 1 биопсии из АЛ, АГ, ИА, БЛ, БГ, ПП и отправить на гистологическое исследование
• 3 смежные биопсии в BL, 1 биопсия в IA, 5 смежных биопсий в AL, 1 биопсия в AG и 2 смежные биопсии в PP будут мгновенно заморожены в жидком азоте.

Места определяются следующим образом:

• АЛ – малая кривизна антрального отдела, в пределах 2-3 см от привратника.
• АГ – большая кривизна антрального отдела, в пределах 2-3 см от привратника.
• IA - incisura angularis
• БЛ — малая кривизна тела, на 4 см проксимальнее угла.
• БГ — средний участок большой кривизны тела, в 8 см от кардии.
• ПП - препилорус

Если есть возможность, возьмут желудочный сок и определят pH желудка. 4 биопсии областей известного желудочного ИМ будут использованы для создания желудочных органоидов. Участники с признаками обширного/выраженного ИМ желудка и/или дисплазии будут затем рандомизированы в группу лечения пирвинием или плацебо. Клинические данные, включая сопутствующие заболевания, использование лекарств, историю тестирования и лечения H. pylori, семейный анамнез, воздействие табака и алкоголя, эндоскопические данные и результаты патологии/гистологии, будут собраны во время регистрации.

Начальная область поражения ИМ определяется путем нацеливания на EGGIM II, что хорошо коррелирует с обширным ИМ. Слизистую оболочку желудка осматривают с помощью HD-WLE с последующим HD-NBI. Процедура OGD будет записана в целях проверки. Все поражения слизистой оболочки, выявленные во время ОГД, будут взяты отдельно для биопсии в рамках обычной клинической практики и отправлены на гистопатологическую оценку. Замороженные образцы биопсии будут храниться в высококачественном банке тканей. Следователи будут следовать вышеуказанному протоколу. Однако они могут отклоняться от протокола, если этого требуют интересы пациента.

Гистологическая оценка:

Для гистологической оценки биоптаты окрашиваются H&E, а также PAS/альциановым синим. Кроме того, будет проведено иммуноокрашивание на маркеры нормального желудочного клона, метаплазии (SPEM и IM) и дисплазии. Экспрессию маркеров в биопсиях будут оценивать с помощью цифровой визуализации и количественного анализа.

Анкета частоты приема пищи (FFQ):

Участникам будет предложено заполнить FFQ один раз во время базового визита, в течение 4 недель с момента сбора образцов стула.

Следовать за:

Группы пирвиния и плацебо будут подвергаться одинаковым процедурам последующего наблюдения. Биопсия слизистой оболочки будет собираться в каждом из контрольных OGD следующим образом:

• По 1 биопсии из АЛ, АГ, ИА, БЛ, БГ, ПП и отправить на гистологическое исследование
• 2 соседних биопсии в BL, 4 соседних биопсии в AL и 2 соседних биопсии в PP будут мгновенно заморожены в жидком азоте.

При каждой последующей эндоскопии будет взято максимум 14 исследовательских биопсий. Оценка EGGIM будет записана. Слизистую оболочку желудка осматривают с помощью HD-WLE с последующим HD-NBI. Процедура OGD будет записана в целях проверки. Все поражения слизистой оболочки, выявленные во время ОГД, будут взяты отдельно для биопсии в рамках обычной клинической практики и отправлены на гистопатологическую оценку. Замороженные образцы биопсии будут храниться в высококачественном банке тканей. Следователи будут следовать вышеуказанному протоколу. Однако они могут отклоняться от протокола, если этого требуют интересы пациента.

Последующие ОГД будут проводиться на 7-й день лечения, через 6 недель после лечения и через 1 год после лечения. Приемлем период окна ± 2 дня для наблюдения OGD на 7-й день лечения и ± 2 недели для наблюдения OGD через 6 недель и 1 год после лечения.

Симптомы будут контролироваться в клинике или по телефону в последний день лечения (14-й день). Известные редкие побочные эффекты включают кожную сыпь, чувствительность к солнцу, диарею, тошноту/рвоту, спазмы желудка. Эти и другие симптомы будут контролироваться у всех субъектов.

Сбор, обработка и анализы крови:

У каждого участника будет взято до 20 мл крови в каждый из следующих моментов времени: исходный уровень, 7-й день лечения, 6 недель после лечения и 1 год после лечения. Сыворотка, плазма и лейкоцитная пленка будут извлечены.

Желудочный сок, слюна и сбор кала:

Берут желудочный сок и измеряют pH желудка при каждой исследовательской эндоскопии, т. е. исходно, на 7-й день лечения, через 6 недель после лечения и через 1 год после лечения. Слюну и стул также будут получать у участников исследовательской эндоскопии для изучения микробиома в следующие моменты времени: исходно, через 6 недель после лечения и через 1 год после лечения.

Человеческие предраковые органоиды:

Исследователи проведут биологические исследования с использованием человеческих органоидов, полученных от пациентов, набранных для участия в клиническом исследовании фазы 2, с целью определения целевых эффектов лечения пирвинием в гетерогенных предраковых клетках и определения функциональных механизмов действия пирвиния как противоракового препарата.

Профилирование сывороточных биомаркеров:

Тотальную РНК из сыворотки выделяют и преобразуют в кДНК, которую затем определяют количественно. Целевые уровни экспрессии микроРНК после нормализации как технических, так и биологических вариаций анализируются для выявления панелей микроРНК с наибольшей способностью различать здоровые и болезненные состояния.

Анализы микробиоты:

Ткани, желудочный сок, слюна и стул будут подвергнуты метагеномному секвенированию нового поколения и направленной культуромике для изучения взаимодействия микроба с хозяином при прогрессировании/регрессии ИМ.

Анализ одной клетки:

Ткани будут помещены в холодный раствор для хранения тканей и диссоциированы на отдельные клетки с помощью ферментативного расщепления, а для определения жизнеспособности клеток будет проведено окрашивание трипановым синим. Диссоциированные клетки затем будут использоваться для различных одноклеточных платформ, таких как scRNA-seq, scDNA-seq, scATAC-seq, одноклеточное иммунное профилирование и другие технологии, связанные с одиночными клетками (сопровождаемые углубленным интегративным вычислительным анализом данных), чтобы определить соответствующие биологические измерения. В дополнение к этому ткани также могут использоваться для нескольких геномных платформ (например. секвенирование экзома и низкочастотное секвенирование и т. д.) и иммуногистологические платформы.

Расчет размера выборки:

Размер выборки в 48 участников (24 на группу) потребуется для выявления разницы в 30 % в доле участников со снижением желудочно-кишечной метаплазии (первичная конечная точка) между группами лечения (пирвиниум) и контрольной группой (плацебо) для достижения Мощность 80% при частоте односторонних ошибок I типа 20%, при условии, что почти у 0% участников будет какое-либо снижение желудочно-кишечной метаплазии, и 20% потенциального процента выбывших. Дизайн исследования называется дизайном скринингового исследования фазы II, который имеет 80% вероятность обнаружить, что лечение действительно эффективно и заслуживает дальнейшего изучения в исследовании фазы III, если результаты исследования благоприятны для лечения. Целевой показатель набора был округлен с 48 до 50 участников.

Статистический анализ:

(А) Общие соображения

Исследователи предполагают, что пирвиний (перорально 2 мг/кг/день в течение 14 дней) по сравнению с контрольным плацебо приведет к абсолютному 50% снижению частоты ИМ желудка, в то время как у наших пациентов с поздними стадиями ИМ желудка этот показатель составляет в среднем 75,6% +/- 8,4%( SD) наличие IM в их биоптатах по сравнению с пациентами с легким ИМ желудка со средним показателем 14% +/- 8,2% (SD) присутствия IM в их желудочные биопсии.

Непрерывные переменные будут суммированы с использованием описательной статистики, включая средние значения, медианы, Q1 и Q3, минимум и максимум, а также стандартные отклонения. Категориальные переменные будут суммированы с использованием процентов и частот. Все доверительные интервалы составляют 95%.

(B) Анализ эффективности

Весь анализ эффективности будет проводиться на основе популяции, получающей лечение. Первичная конечная точка процента пациентов со снижением желудочно-кишечной метаплазии (и/или дисплазии для возврата к полной кишечной метаплазии или нормальной слизистой оболочке желудка) будет рассчитываться отдельно для группы лечения и плацебо. Разница в процентах будет представлена ​​вместе с точным доверительным интервалом 95%. Никакие значения p не будут сообщаться, учитывая исследовательский характер исследования. Вторичные конечные точки с бинарными исходами будут анализироваться аналогично первичной конечной точке. Вторичные непрерывные конечные точки будут представлены как среднее изменение по сравнению с исходным уровнем в последующие моменты времени. Разница в средних значениях между группами будет представлена ​​в каждый момент времени наблюдения вместе с их 95% доверительными интервалами.

(C) Анализ безопасности

Весь анализ безопасности будет представлен на основе пролеченной популяции. Неблагоприятные и серьезные нежелательные явления будут представлены с указанием количества субъектов, испытывающих каждый тип нежелательных явлений и серьезных нежелательных явлений, а также их связи с группой и степени тяжести с использованием подсчетов и процентов. Лабораторные результаты будут представлены с их средними значениями в каждый момент времени оценки, а также с процентом аномальных и клинически значимых результатов для каждой группы.

(D) Промежуточный анализ

Официального промежуточного анализа не планируется. Однако главный исследователь будет периодически отслеживать данные по безопасности вслепую. Данные о безопасности будут периодически контролироваться комитетом, в состав которого войдут директор Центра эндоскопии НУЗ, заведующий отделением гастроэнтерологии и гепатологии НУЗ и руководитель отдела безопасности гастроэнтерологии и гепатологии НУЗ.