Pyrviniumin käyttö vatsan syöpää edeltävien tilojen kääntämiseen

Tavoitteet:

Tutkimuksen päätavoitteena on saada lisätietoa pyrviniumin käytön tehokkuudesta ja turvallisuudesta ihmisillä, joilla on mahalaukun suoliston metaplasiaa ja/tai dysplasiaa, jotta voidaan palata täydelliseen suolen metaplasiaan tai normaaliin mahan limakalvoon. Toissijaisina tavoitteina on arvioida pyrviniumhoidon tehokkuutta metaplasiaa ja/tai dysplasiaa sairastavien potilaiden syöpää esiasteellisissa mahalaukuissa, määrittää pyrviniumhoidon kohdennetut vaikutukset heterogeenisissä esisyöpäsoluissa, määritellä pyrviniumin vaikutusmekanismit syövän vastaisena aineena. lääkettä, määrittää pyrviniumin vaikutukset seerumin biomarkkereiden tasoon, jotka liittyvät GC-riskin ennustamiseen ja tutkia pyrviniumin vaikutusta mahalaukun mikrobiomi.

Opintosuunnitelma:

Tämä on vaiheen 2 satunnaistettu kliininen tutkimus, jonka tavoitteena on saada mukaan 50 osallistujaa, joilla on laaja/merkittävä suolen metaplasia (IM) ja/tai dysplasia. Ilmoittautumisen jälkeen suoritetaan perusesophagogastroduodenoscopy (OGD) käyttäen modifioitua Cambridge-protokollaa riittävän näytteenoton varmistamiseksi. Koska useimmat osallistujat rekrytoidaan ennen histologiansa vahvistamista lähtötilanteessa, jotkut osallistujat suljetaan pois tutkimuksesta, jos heillä ei ole IM:tä, laajaa/merkittyä IM:tä tai dysplasiaa lähtötilanteessa. 50 osallistujaa, joilla on merkkejä laajasta/merkittävästä mahalaukun IM:stä ja/tai dysplasiasta, saavat pyrviniumia (2 mg/kg/vrk) tai lumelääkettä suun kautta satunnaistussuhteessa 1:1 päivittäin 14 päivän ajan. Osallistujia seurataan klinikalla tai puhelimitse oireiden seurantaa varten 14. hoitopäivänä. Osallistujat pysyvät sokeina, ja tutkimusryhmä jaetaan sokeutuneisiin ja sokeutumattomiin ryhmiin. Vain sokkoutumattomalla ryhmällä on pääsy altistumiseen (pyrvinium vs. lumelääke) kokeen aktiivisen vaiheen aikana. Klinikalla on yhteensä 3 seurantatutkimuskäyntiä satunnaistamisen jälkeen enintään vuoden ajan viimeisen hoitopäivän jälkeen.

Perustaso:

Osallistujille tehdään OGD ja biopsia IM:n ja dysplasian tilan varmistamiseksi. Mahalaukun limakalvon biopsiat kerätään seuraavasti:

• 1 biopsia kustakin AL:sta, AG:sta, IA:sta, BL:stä, BG:stä, PP:stä ja lähetettiin histologiseen tutkimukseen
• Kolme vierekkäistä biopsiaa BL:ssä, 1 biopsia IA:ssa, 5 vierekkäistä biopsiaa AL:ssa, 1 biopsia AG:ssa ja 2 vierekkäistä biopsiaa PP:ssä pikapakastetaan nestetypessä

Paikat on määritelty seuraavasti:

• AL - antrumin pienempi kaarevuus, 2-3 cm pyloruksesta
• AG - antrumin suurempi kaarevuus, 2-3 cm pyloruksesta
• IA - incisura angularis
• BL - corpuksen pienempi kaarevuus, 4 cm proksimaalisesti kulmakivestä
• BG - rungon suuremman kaarevuuden keskiosa, 8 cm sydämestä
• PP - prepylorus

Mahanestettä otetaan mahdollisuuksien mukaan ja mahalaukun pH mitataan. 4 biopsiaa tunnetuista mahalaukun IM-alueista käytetään mahaorganoidien tuottamiseen. Osallistujat, joilla on näyttöä laajasta/merkittävästä mahalaukun IM:stä ja/tai dysplasiasta, satunnaistetaan joko pyrvinium- tai lumelääkehoitoryhmään. Kliiniset tiedot, mukaan lukien liitännäissairaudet, lääkkeiden käyttö, H. pylori -testaus ja -hoitohistoria, sukuhistoria, tupakka- ja alkoholialtistus, endoskooppiset tiedot ja patologiset/histologiset tulokset kerätään ilmoittautumisen yhteydessä.

Alkuperäinen IM-leesioalue paikantuu kohdistamalla EGGIM II:een, mikä korreloi hyvin laajan IM:n kanssa. Mahalaukun limakalvoa tarkkaillaan HD-WLE:llä, jota seuraa HD-NBI. OGD-menettely tallennetaan vahvistusta varten. Kaikista OGD:n aikana tunnistetuista limakalvovaurioista otetaan biopsia erikseen osana normaalia kliinistä käytäntöä ja lähetetään histopatologiseen arviointiin. Pakastetut biopsianäytteet säilytetään korkealaatuisessa kudospankissa. Tutkijat noudattavat yllä olevaa protokollaa. He voivat kuitenkin poiketa protokollasta, jos potilaan edut sitä edellyttävät.

Histologinen arvio:

Histologista arviointia varten biopsiat värjätään H&E:n ja PAS:n/Alcian sinisen suhteen. Lisäksi immunovärjäys suoritetaan normaalien mahalaukun linjojen, metaplasian (SPEM ja IM) ja dysplasian markkereille. Markkerin ilmentyminen biopsioissa arvioidaan digitaalisella kuvantamisella ja kvantitaatiolla.

Ruokatiheyskysely (FFQ):

Osallistujia pyydetään suorittamaan FFQ kerran lähtötilanteessa 4 viikon kuluessa ulostenäytteen ottamisesta.

Seuranta:

Sekä pyrvinium- että lumeryhmät käyvät läpi samat seurantatoimenpiteet. Limakalvobiopsiat kerätään jokaisessa seurantaseurannassa OGD:ssä seuraavasti:

• 1 biopsia kustakin AL:sta, AG:sta, IA:sta, BL:stä, BG:stä, PP:stä ja lähetettiin histologiseen tutkimukseen
• 2 vierekkäistä biopsiaa BL:ssä, 4 vierekkäistä biopsiaa AL:ssa ja 2 vierekkäistä biopsiaa PP:ssä pikapakastetaan nestetypessä

Jokaisessa seurantaendoskopiassa otetaan enintään 14 tutkimusbiopsiaa. EGGIM-pisteet tallennetaan. Mahalaukun limakalvoa tarkkaillaan HD-WLE:llä, jota seuraa HD-NBI. OGD-menettely tallennetaan vahvistusta varten. Kaikista OGD:n aikana tunnistetuista limakalvovaurioista otetaan biopsia erikseen osana normaalia kliinistä käytäntöä ja lähetetään histopatologiseen arviointiin. Pakastetut biopsianäytteet säilytetään korkealaatuisessa kudospankissa. Tutkijat noudattavat yllä olevaa protokollaa. He voivat kuitenkin poiketa protokollasta, jos potilaan edut sitä edellyttävät.

Seurantaseuranta OGD:t tehdään hoidon 7. päivänä, 6 viikkoa hoidon jälkeen ja 1 vuosi hoidon jälkeen. Ikkunajakso ± 2 päivää seuranta-OGD:lle hoidon 7. päivänä ja ± 2 viikkoa seuranta-OGD:lle 6 viikon ja 1 vuoden hoidon jälkeen ovat hyväksyttäviä.

Oireita seurataan klinikalla tai puhelinseurannalla hoidon viimeisenä päivänä (päivä 14). Tunnettuja harvinaisia ​​haittavaikutuksia ovat ihottuma, auringon herkkyys, ripuli, pahoinvointi/oksentelu, vatsakrampit, ja näitä ja muita oireita seurataan kaikilla koehenkilöillä.

Verenotto, käsittely ja analyysit:

Jopa 20 ml verta otetaan jokaiselta osallistujalta kullakin seuraavista ajankohdista: lähtötilanne, hoidon päivä 7, 6 viikkoa hoidon jälkeen ja 1 vuosi hoidon jälkeen. Seerumi, plasma ja buffy coat uutetaan.

Mahamehu-, sylki- ja ulostekokoelma:

Mahanestettä otetaan ja mahalaukun pH mitataan jokaisessa tutkimusendoskopiassa, eli lähtötasolla, hoitopäivänä 7, 6 viikkoa hoidon jälkeen ja 1 vuoden kuluttua hoidon jälkeen. Sylkeä ja ulostetta saadaan myös mikrobiomitutkimusten endoskopiaan osallistuvilta seuraavina ajankohtina: lähtötilanne, 6 viikkoa hoidon jälkeen ja 1 vuosi hoidon jälkeen.

Ihmisen syöpää edeltävät organoidit:

Tutkijat suorittavat biologisia tutkimuksia, joissa käytetään 2. vaiheen kliiniseen tutkimukseen rekrytoitujen potilaiden ihmisorganoideja. Tavoitteena on selvittää pyrviniumhoidon kohdennetut vaikutukset heterogeenisissä esisyöpäsoluissa ja määritellä pyrviniumin toimintamekanismit syöpälääkkeenä.

Seerumin biomarkkerin profilointi:

Seerumin kokonais-RNA eristetään ja muunnetaan cDNA:ksi, joka sitten kvantifioidaan. MiRNA:n kohdeekspressiotasot analysoidaan sekä teknisten että biologisten muunnelmien normalisoinnin jälkeen sellaisten miRNA-paneelien tunnistamiseksi, joilla on suurin erotuskyky terveiden ja sairaustilojen välillä.

Mikrobiota-analyysit:

Kudokset, mahaneste, sylki ja uloste käyvät läpi seuraavan sukupolven metagenomisen sekvensoinnin ja suunnatun kulturomiikan mikrobien ja isännän välisten vuorovaikutusten tutkimiseksi IM:n etenemisessä/regressiossa.

Yhden solun analyysi:

Kudokset asetetaan kylmäkudossäilytysliuokseen ja dissosioidaan yksittäisiksi soluiksi käyttämällä entsymaattista pilkkomista, ja trypaaninsinivärjäys suoritetaan solujen elinkelpoisuuden määrittämiseksi. Dissosioituneita soluja käytetään sitten erilaisissa yksisolualustoissa, kuten scRNA-seq, scDNA-seq, scATAC-seq, yksisoluinen immuuniprofilointi ja muut yksisoluihin liittyvät tekniikat (joihin liittyy syvällinen integroiva laskennallinen data-analyysi). vastaavat biologiset mittaukset. Tämän lisäksi kudoksia voidaan käyttää myös useille genomialustoille (esim. exome-sekvensointi ja alipäästösekvensointi jne.) ja immunohistologiset alustat.

Näytteen koon laskeminen:

Otoskoko on 48 osallistujaa (24 ryhmää kohden), jotta voidaan havaita 30 %:n ero niiden osallistujien osuudessa, joilla mahalaukun suoliston metaplasia (ensisijainen päätepiste) on vähentynyt hoitoryhmien (Pyrvinium) ja kontrolliryhmien (Placebo) välillä. 80 % teho 20 %:n yksipuolisella tyypin I virhetasolla, olettaen, että lähes 0 % osallistujista vähentää mahalaukun suoliston metaplasiaa, ja 20 % mahdollinen keskeyttämisprosentti. Tutkimussuunnitelmasta käytetään nimitystä Phase II Screening Trial Design, jossa 80 %:n todennäköisyydellä hoito on todella tehokas ja kannattaa tutkia tarkemmin vaiheen III tutkimuksessa, mikäli tutkimustulos on hoidon kannalta suotuisa. Rekrytointitavoite on pyöristetty 48 osallistujasta 50 osallistujaan.

Tilastollinen analyysi:

(A) Yleisiä huomioita

Tutkijat olettavat, että pyrvinium (suun kautta 2 mg/kg/vrk 14 päivän ajan) verrattuna kontrolli lumelääkkeeseen johtaisi absoluuttisen 50 %:n laskuun mahalaukun IM:ssä, jolloin edistyneillä mahalaukun IM-potilaillamme on keskimäärin 75,6 % +/- 8,4 % ( SD) IM:n esiintyminen biopsioissa verrattuna lieviin mahalaukun IM-potilaisiin, joiden keskiarvo 14 % +/- 8,2 %(SD) IM:n läsnäolo mahakoepalassaan.

Jatkuvista muuttujista tehdään yhteenveto kuvaavien tilastojen avulla, mukaan lukien keskiarvot, mediaanit, Q1 ja Q3, minimi ja maksimi sekä keskihajonnat. Kategoriset muuttujat kootaan yhteen prosenttiosuuksilla ja taajuuksilla. Kaikki luottamusvälit ovat 95 %.

(B) Tehokkuusanalyysit

Kaikki tehoanalyysit tehdään hoitoaikeiden perusteella. Ensisijainen päätetapahtuma, joka on potilaiden prosenttiosuus, joilla mahalaukun suoliston metaplasia (ja/tai dysplasia palaa täydelliseksi suolen metaplasiaksi tai normaaliksi mahan limakalvoksi) lasketaan hoito- ja lumelääkeryhmälle erikseen. Prosentin ero esitetään yhdessä 95 %:n tarkan luottamusvälin kanssa. P-arvoja ei raportoida ottaen huomioon tutkimuksen tutkiva luonne. Toissijaiset päätepisteet, joilla on binaariset tulokset, analysoidaan samalla tavalla kuin ensisijainen päätepiste. Toissijaiset jatkuvat päätepisteet esitetään keskimääräisenä muutoksena lähtötasosta seuranta-ajankohtina. Keskiarvojen ero ryhmien välillä esitetään kussakin seuranta-ajankohdassa sekä niiden 95 %:n luottamusvälit.

(C) Turvallisuusanalyysit

Kaikki turvallisuusanalyysit esitetään hoidetun väestön perusteella. Haitalliset ja vakavat haittatapahtumat esitetään koehenkilöiden lukumäärän kanssa, jotka kokevat kunkin tyyppisiä haittatapahtumia ja vakavia haittatapahtumia, sekä niiden suhde ryhmään ja vakavuus käyttämällä lukumääriä ja prosenttiosuuksia. Laboratoriotulokset esitetään keskiarvoineen kullakin arviointihetkellä sekä poikkeavien ja kliinisesti merkittävien tulosten prosenttiosuus kussakin ryhmässä.

(D) Välianalyysit

Virallista välianalyysiä ei ole suunniteltu. Vastuullinen tutkija kuitenkin valvoo turvallisuustietoja ajoittain sokkoineen. Turvallisuustietoja seuraisi määräajoin komitea, johon kuuluu NUH:n endoskopiakeskuksen johtaja, NUH:n gastroenterologian ja hepatologian osaston johtaja ja NUH:n gastroenterologian ja hepatologian osaston turvallisuuspäällikkö.