Uso de pirvinio para revertir las condiciones precancerosas del estómago

Objetivos:

Los principales objetivos del estudio son obtener datos adicionales sobre la eficacia y seguridad del uso de pirvinio en participantes humanos con metaplasia y/o displasia intestinal gástrica para la reversión a metaplasia intestinal completa o mucosa gástrica normal. Los objetivos secundarios son evaluar la eficacia del tratamiento con pirvinio en gastroides precancerosos humanos derivados de pacientes con metaplasia y/o displasia, determinar los efectos específicos del tratamiento con pirvinio en células precancerosas heterogéneas, definir los mecanismos funcionales de acción del pirvinio como anticancerígeno. fármaco, determinar los efectos del pirvinio en el nivel de biomarcadores séricos asociados con la predicción del riesgo de CG e investigar el impacto del pirvinio en el microbioma gástrico.

Diseño del estudio:

Este es un ensayo clínico aleatorizado de fase 2 que tiene como objetivo reclutar a 50 participantes con metaplasia intestinal (MI) y/o displasia extensa/marcada. Después de la inscripción, se realiza una esofagogastroduodenoscopia (OGD) inicial utilizando un protocolo de Cambridge modificado para garantizar un muestreo adecuado. Como la mayoría de los participantes serán reclutados antes de confirmar su histología al inicio del estudio, algunos participantes serán retirados del estudio si se detecta que no tienen MI, ni IM extensa/marcada, ni displasia al inicio del estudio. 50 participantes con evidencia de IM gástrica extensa/marcada y/o displasia recibirán pirvinio (2 mg/kg/día) o placebo por vía oral en una proporción de aleatorización de 1:1 diariamente durante un período de 14 días. Se realizará un seguimiento de los participantes en la clínica o por teléfono para controlar los síntomas el día 14 de tratamiento. Los participantes permanecerán cegados y el equipo de estudio se dividirá en equipos cegados y no cegados. Solo el equipo no cegado tendrá acceso a la exposición (pirvinio frente a placebo) durante la fase activa del ensayo. En total, habrá 3 visitas de seguimiento del estudio en la clínica después de la aleatorización, hasta un año después del último día de tratamiento.

Base:

Los participantes se someterán a una OGD inicial y una biopsia para determinar el estado de la MI y la displasia. Las biopsias de la mucosa gástrica se recolectarán de la siguiente manera:

• 1 biopsia de cada uno de AL, AG, IA, BL, BG, PP y enviada para examen histológico
• 3 biopsias adyacentes en BL, 1 biopsia en IA, 5 biopsias adyacentes en AL, 1 biopsia en AG y 2 biopsias adyacentes en PP se congelarán rápidamente en nitrógeno líquido

Las ubicaciones se definen de la siguiente manera:

• AL: curvatura menor del antro, dentro de 2-3 cm del píloro
• AG: curvatura mayor del antro, dentro de 2-3 cm del píloro
• IA - incisura angular
• BL: curvatura menor del cuerpo, 4 cm proximal al ángulo
• BG: porción media de la curvatura mayor del cuerpo, a 8 cm del cardias
• PP - prepíloro

Se tomará jugo gástrico si existe la oportunidad de hacerlo y se medirá el pH gástrico. Se utilizarán 4 biopsias de áreas de IM gástrica conocida para generar organoides gástricos. Los participantes con evidencia de IM gástrica extensa/marcada y/o displasia serán asignados al azar al grupo de tratamiento con pirvinio o placebo. Los datos clínicos que incluyen comorbilidades, uso de medicamentos, pruebas de H. pylori e historial de tratamiento, antecedentes familiares, exposición al tabaco y al alcohol, datos endoscópicos y resultados de patología/histología se recopilarán en el momento de la inscripción.

El área de lesión inicial de IM se localiza apuntando a EGGIM II, lo que se correlaciona bien con IM extensa. La mucosa gástrica se observa con HD-WLE seguida de HD-NBI. El procedimiento de OGD quedará registrado a efectos de verificación. Todas las lesiones mucosas identificadas durante la OGD se biopsiarán por separado como parte de la práctica clínica normal y se enviarán para evaluación histopatológica. Las muestras de biopsia congeladas se almacenarán en un banco de tejidos de alta calidad. Los investigadores seguirán el protocolo anterior. No obstante, podrán apartarse del protocolo si el interés del paciente así lo requiere.

Evaluación histológica:

Para la evaluación histológica, las biopsias se teñirán con H&E y con PAS/azul alcián. Además, se realizará inmunotinción para marcadores de linajes gástricos normales, metaplasia (SPEM e IM) y displasia. La expresión de marcadores en biopsias se evaluará con imágenes digitales y cuantificación.

Cuestionario de frecuencia alimentaria (FFQ):

Se pedirá a los participantes que completen un FFQ una vez en la visita inicial, dentro de las 4 semanas posteriores a la recolección de la muestra de heces.

Hacer un seguimiento:

Tanto el grupo de pirvinio como el de placebo se someterán a los mismos procedimientos de seguimiento. Se recolectarán biopsias de mucosas en cada uno de los OGD de vigilancia de seguimiento de la siguiente manera:

• 1 biopsia de cada uno de AL, AG, IA, BL, BG, PP y enviada para examen histológico
• 2 biopsias adyacentes en BL, 4 biopsias adyacentes en AL y 2 biopsias adyacentes en PP se congelarán rápidamente en nitrógeno líquido

Se tomarán un máximo de 14 biopsias de investigación en cada una de las endoscopias de seguimiento. Se registrará la puntuación de EGGIM. La mucosa gástrica se observa con HD-WLE seguida de HD-NBI. El procedimiento de OGD quedará registrado a efectos de verificación. Todas las lesiones mucosas identificadas durante la OGD se biopsiarán por separado como parte de la práctica clínica normal y se enviarán para evaluación histopatológica. Las muestras de biopsia congeladas se almacenarán en un banco de tejidos de alta calidad. Los investigadores seguirán el protocolo anterior. No obstante, podrán apartarse del protocolo si el interés del paciente así lo requiere.

Los OGD de vigilancia de seguimiento se realizarán el día 7 de tratamiento, 6 semanas después del tratamiento y 1 año después del tratamiento. Es aceptable un período de ventana de ± 2 días para la OGD de vigilancia el día 7 de tratamiento, y ± 2 semanas para la OGD de vigilancia a las 6 semanas y 1 año después del tratamiento.

Los síntomas se controlarán mediante seguimiento clínico o telefónico el último día del tratamiento (día 14). Los efectos secundarios raros conocidos incluyen erupción cutánea, sensibilidad al sol, diarrea, náuseas/vómitos, calambres estomacales y estos y otros síntomas se controlarán en todos los sujetos.

Recolección, procesamiento y análisis de sangre:

Se extraerán hasta 20 ml de sangre de cada participante en cada uno de los siguientes momentos: inicio, día 7 de tratamiento, 6 semanas después del tratamiento y 1 año después del tratamiento. Se extraerá el suero, el plasma y la capa leucocitaria.

Recogida de jugos gástricos, saliva y heces:

Se tomará jugo gástrico y se medirá el pH gástrico en cada endoscopia de investigación, es decir, al inicio, el día 7 de tratamiento, 6 semanas después del tratamiento y 1 año después del tratamiento. También se obtendrá saliva y heces de los participantes en endoscopia de investigación para estudios de microbioma en los siguientes momentos: inicio, 6 semanas después del tratamiento y 1 año después del tratamiento.

Organoides humanos precancerosos:

Los investigadores realizarán estudios biológicos utilizando organoides humanos derivados de pacientes reclutados para el ensayo clínico de fase 2, con el objetivo de determinar los efectos específicos del tratamiento con pirvinio en células precancerosas heterogéneas y definir los mecanismos funcionales de acción del pirvinio como fármaco anticancerígeno.

Perfil de biomarcadores séricos:

El ARN total del suero se aísla y se convierte en ADNc, que luego se cuantifica. Se analizan los niveles de expresión de miARN objetivo después de la normalización de las variaciones técnicas y biológicas para identificar paneles de miARN con el mayor poder discriminatorio entre estados de salud y enfermedad.

Análisis de microbiota:

Los tejidos, el jugo gástrico, la saliva y las heces se someterán a secuenciación metagenómica de próxima generación y culturómica dirigida para estudiar las interacciones microbio-huésped en la progresión/regresión de la IM.

Análisis de celda única:

Los tejidos se colocarán en una solución fría de almacenamiento de tejidos y se disociarán en células individuales mediante digestión enzimática y se realizará tinción con azul tripán para determinar la viabilidad celular. Luego, las células disociadas se usarán para varias plataformas unicelulares, como scRNA-seq, scDNA-seq, scATAC-seq, perfiles inmunes unicelulares y otras tecnologías relacionadas con unicélulas (acompañadas de un análisis computacional integrador en profundidad) para determinar las respectivas mediciones biológicas. Además de esto, los tejidos también podrían usarse para varias plataformas genómicas (p. ej. secuenciación del exoma y secuenciación de paso bajo, etc.) y plataformas inmunohistológicas.

Cálculo del tamaño de la muestra:

Se necesitará un tamaño de muestra de 48 participantes (24 por grupo) para detectar una diferencia del 30 % en la proporción de participantes con una reducción de la metaplasia intestinal gástrica (criterio de valoración principal) entre los grupos de tratamiento (Pyrvinium) y control (Placebo) para lograr 80% de potencia con una tasa de error tipo I unilateral del 20%, suponiendo que cerca del 0% de los participantes tendrá alguna reducción en la metaplasia intestinal gástrica y una tasa potencial de abandono del 20%. El diseño del estudio se conoce como Diseño de ensayo de detección de fase II, que tiene un 80 % de posibilidades de detectar que el tratamiento es realmente eficaz y vale la pena investigarlo más a fondo en un ensayo de fase III si el estudio resulta favorable para el tratamiento. El objetivo de reclutamiento se ha redondeado de 48 a 50 participantes.

Análisis estadístico:

(A) Consideraciones generales

Los investigadores plantean la hipótesis de que el pirvinio (2 mg/kg/día por vía oral durante 14 días) en comparación con el placebo de control daría como resultado una reducción absoluta del 50 % en la IM gástrica, por lo que nuestros pacientes con IM gástrica avanzada tienen una media del 75,6 % +/- 8,4 % ( SD) presencia de MI en sus biopsias en comparación con pacientes con IM gástrica leve con una media de 14% +/- 8,2%(SD) de presencia de MI en sus biopsias. biopsias.

Las variables continuas se resumirán utilizando estadísticas descriptivas que incluyen medias, medianas, Q1 y Q3, mínimo y máximo, y desviaciones estándar. Las variables categóricas se resumirán mediante porcentajes y frecuencias. Todos los intervalos de confianza son del 95%.

(B) Análisis de eficacia

Todos los análisis de eficacia se realizarán en función de la población por intención de tratar. El criterio de valoración principal del porcentaje de pacientes con una reducción de la metaplasia intestinal gástrica (y/o displasia para reversión a metaplasia intestinal completa o mucosa gástrica normal) se calculará para el grupo de tratamiento y placebo por separado. La diferencia en el porcentaje se presentará junto con un intervalo de confianza exacto del 95%. No se informarán valores de p considerando la naturaleza exploratoria del estudio. Los criterios de valoración secundarios con resultados binarios se analizarán de forma similar al criterio de valoración principal. Los criterios de valoración continuos secundarios se presentarán como cambio medio desde el inicio en los momentos de seguimiento. La diferencia en los valores medios entre los grupos se presentará en cada momento de seguimiento junto con sus intervalos de confianza del 95%.

(C) Análisis de seguridad

Todos los análisis de seguridad se presentarán en función de la población tratada. Los eventos adversos y graves se presentarán con el número de sujetos que experimentaron cada tipo de eventos adversos y eventos adversos graves junto con su relación con el grupo y la gravedad mediante recuentos y porcentajes. Los resultados de laboratorio se presentarán con sus valores medios en cada momento de evaluación junto con el porcentaje de resultados anormales y clínicamente significativos para cada grupo.

(D) Análisis provisionales

No hay ningún análisis provisional formal previsto. Sin embargo, el investigador principal controlará periódicamente los datos de seguridad de forma ciega. Habría un seguimiento periódico de los datos de seguridad por parte de un comité compuesto por el Director del Centro de Endoscopia de NUH, el Jefe del Departamento de Gastroenterología y Hepatología de NUH y el Jefe de Seguridad del Departamento de Gastroenterología y Hepatología de NUH.