Kryokonzervace trombocytů (PLT-CRIO)

Trombocyty jsou nezbytnými složkami krve s klíčovými rolemi jak v hemostáze, tak v zánětu. Trombocytopenie, definovaná jako snížení počtu cirkulujících trombocytů, může být důsledkem snížené produkce v kostní dřeni, zvýšené spotřeby, sekvestrace ve slezině nebo krvácivých epizod a běžně se řeší transfuzemi trombocytů s cílem obnovit dostatečné počty a v případě potřeby kontrolovat krvácení. V klinické praxi se většina transfuzí trombocytů podává trombocytopenickým onkologickým pacientům s profylaktickým záměrem, kde hlavním požadavkem je trvalé přežívání trombocytů za účelem minimalizace počtu transfuzí. Naopak u aktivně krvácejících pacientů se od transfuzí trombocytů očekává rychlý a účinný hemostatický efekt, zatímco doba jejich cirkulace je méně podstatná. V současnosti se koncentráty trombocytů skladují při pokojové teplotě (22-24 °C) za kontinuálního míchání po dobu až pěti dnů, poté jsou, pokud nebyly použity, vyřazeny. Tento způsob skladování s sebou nese riziko bakteriální kontaminace a vyvolává metabolické a strukturální změny, které narušují funkci trombocytů, jev známý jako poškození trombocytů při skladování (PSL). Krátká doba skladování navíc omezuje dostupnost trombocytů v nouzových situacích, jak bylo pozorováno během pandemie SARS-CoV-2, kdy poptávka po profylaktických transfuzích trombocytů zůstávala konstantní, zatímco nabídka byla výrazně omezena. Jako reakci na to zavedla jednotka transfuzní medicíny v Reggio Emilia kryoprezervaci koncentrátů trombocytů, aby předešla budoucím nedostatkům. Kryoprezervace umožňuje skladování trombocytů po dobu až dvou let, což představuje atraktivní alternativu k tradičním metodám, nejen prodlužuje dobu skladování, ale také snižuje riziko bakteriální kontaminace. Ačkoli nedávné studie prokázaly bezpečnost a účinnost kryokonzervovaných trombocytů u krvácejících pacientů, pro jejich použití v profylaxi u onko-hematologických pacientů existují omezené důkazy. Hlavní obavy zahrnují potenciál zhoršení trombotického rizika u pacientů s chronickou hyperkoagulabilitou a uvolňování bioaktivních molekul, jako jsou růstové faktory a prozánětlivé cytokiny během rozmrazování, což by mohlo mít protumorigenní účinky. Interakce trombocytů s nádory jsou známé jako komplexní, přičemž vyvíjejí jak protinádorové, tak pronádorové vlivy, přičemž rovnováha často favore nádorovou progresi. Tato studie si proto klade za cíl vyhodnotit dopad kryoprezervace na funkčnost, strukturu a morfologii trombocytů a posoudit potenciální protumorální účinky po rozmrazení. Pomocí komparativního přístupu byly analyzovány kryokonzervované trombocyty získané aferézou spolu se standardními trombocyty skladovanými při pokojové teplotě, které jsou v současnosti považovány za zlatý standard pro profylaktickou transfuzi. Protokol zahrnuje nábor dárců na jednotce transfuzní medicíny AUSL-IRCCS v Reggio Emilia, přičemž koncentráty trombocytů jsou připraveny a kryokonzervovány pomocí 6% dimethylsulfoxidu (DMSO) a také alternativními přístupy využívajícími intracelulární a extracelulární kryoprotektanty, samostatně nebo v kombinaci, s nižší cytotoxicitu popsanou v jiných transfuzních a kryobiologických prostředích. Vzorky trombocytů byly hodnoceny před zmrazením a po rozmrazení v několika časových bodech (1, 3 a 6 hodin po rekonstituci). Analýzy zahrnovaly míru obnovy, změny pH, uvolňování bioaktivních faktorů, markery aktivace, hemostatický potenciál (pomocí tromboelastografie) a morfologické změny hodnocené průtokovou cytometrií, mikroskopií a synchrotronovou Fourierovou transformační infračervenou (FTIR) mikrospektroskopií. Dále byla potenciální protumorální aktivita kryokonzervovaných versus čerstvých trombocytů zkoumána in vitro pomocí kokultivačních systémů s buněčnými liniemi karcinomu prsu a leukémie se zaměřením na proliferaci a testy interakce trombocytů s buňkami. Hlavním cílem tohoto projektu je určit účinky kryogenního skladování na funkci trombocytů. Vedlejším cílem je identifikovat kryokonzervovaný trombocytový produkt s nejvhodnějším bezpečnostním profilem pro profylaktickou transfuzi u onko-hematologických pacientů. Studie je prováděna BioMetLab na jednotce transfuzní medicíny AUSL-IRCCS v Reggio Emilia v souladu s Helsinskou deklarací po získání informovaného souhlasu všech dárců.