Crioconservazione delle Piastrine (PLT-CRIO)

Le piastrine sono componenti ematiche essenziali con ruoli fondamentali sia nell'emostasi che nell'infiammazione. La trombocitopenia, definita come una riduzione della conta piastrinica circolante, può derivare da una ridotta produzione midollare, aumento del consumo, sequestro splenico o episodi emorragici, e viene comunemente gestita attraverso trasfusioni piastriniche mirate a ripristinare conte adeguate e, quando necessario, a controllare l'emorragia. Nella pratica clinica, la maggior parte delle trasfusioni piastriniche viene somministrata a pazienti oncologici trombocitopenici con intento profilattico, dove il requisito principale è la sopravvivenza piastrinica prolungata per minimizzare il numero di trasfusioni. Al contrario, nei pazienti con emorragia attiva, le trasfusioni piastriniche sono attese per fornire un'emostasi rapida ed efficiente, mentre il loro tempo di circolazione è di minore rilevanza. Attualmente, i concentrati piastrinici vengono conservati a temperatura ambiente (22-24 °C) sotto agitazione continua per un massimo di cinque giorni, dopo i quali vengono scartati se non utilizzati. Questo metodo di conservazione comporta il rischio di contaminazione batterica e induce cambiamenti metabolici e strutturali che compromettono la funzione piastrinica, un fenomeno noto come lesione da conservazione piastrinica (PSL). Inoltre, la breve durata di conservazione limita la disponibilità di piastrine in situazioni di emergenza, come osservato durante la pandemia di SARS-CoV-2, quando la domanda di trasfusioni piastriniche profilattiche è rimasta costante mentre l'offerta era gravemente limitata. In risposta, l'Unità di Medicina Trasfusionale di Reggio Emilia ha introdotto la crioconservazione dei concentrati piastrinici per prevenire future carenze. La crioconservazione consente la conservazione delle piastrine fino a due anni, offrendo un'alternativa interessante ai metodi convenzionali, non solo estendendo la durata di conservazione ma anche riducendo il rischio di contaminazione batterica. Sebbene studi recenti abbiano dimostrato la sicurezza e l'efficacia delle piastrine crioconservate nei pazienti emorragici, esistono evidenze limitate per il loro uso in profilassi tra i pazienti onco-ematologici. Le principali preoccupazioni includono la potenziale esacerbazione del rischio trombotico in pazienti con ipercoagulabilità cronica e il rilascio di molecole bioattive come fattori di crescita e citochine pro-infiammatorie durante lo scongelamento, che potrebbero avere effetti pro-tumorigenici. Le interazioni piastrina-tumore sono note per essere complesse, esercitando influenze sia pro che anti-tumorali, con il bilanciamento che spesso favorisce la progressione tumorale. Il presente studio mira quindi a valutare l'impatto della crioconservazione sulla funzionalità, struttura e morfologia piastrinica, nonché a valutare i potenziali effetti pro-tumorali dopo lo scongelamento. Utilizzando un approccio comparativo, le piastrine crioconservate ottenute mediante aferesi sono state analizzate insieme a piastrine conservate standard a temperatura ambiente, attualmente considerate lo standard di riferimento per la trasfusione profilattica. Il protocollo prevede il reclutamento di donatori presso l'Unità di Medicina Trasfusionale dell'AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, con concentrati piastrinici preparati e crioconservati utilizzando dimetilsolfossido (DMSO) al 6% nonché approcci alternativi che impiegano crioprotettori intracellulari ed extracellulari, singolarmente o in combinazione, con minore citotossicità riportata in altri contesti trasfusionali e criobiologici. I campioni piastrinici sono stati valutati prima del congelamento e dopo lo scongelamento in più momenti temporali (1, 3 e 6 ore dopo la ricostituzione). Le analisi includevano tasso di recupero, cambiamenti di pH, rilascio di fattori bioattivi, marcatori di attivazione, potenziale emostatico (tramite tromboelastografia) e alterazioni morfologiche valutate mediante citometria a flusso, microscopia e microspettroscopia infrarossa a trasformata di Fourier (FTIR) basata su sincrotrone. Inoltre, la potenziale attività pro-tumorale delle piastrine crioconservate rispetto a quelle fresche è stata investigata in vitro utilizzando sistemi di co-coltura con linee cellulari di cancro al seno e leucemia, concentrandosi su proliferazione e test di interazione piastrina-cellula. L'obiettivo primario di questo progetto è determinare gli effetti della conservazione criogenica sulla funzione piastrinica. L'obiettivo secondario è identificare il prodotto piastrinico crioconservato con il profilo di sicurezza più appropriato per la trasfusione profilattica in pazienti onco-ematologici. Lo studio è condotto dal BioMetLab presso l'Unità di Medicina Trasfusionale dell'AUSL-IRCCS di Reggio Emilia in conformità con la Dichiarazione di Helsinki, previo consenso informato di tutti i donatori.