Anti-MART-1 F5 lymfocyty k léčbě vysoce rizikových pacientů s melanomem

Pozadí:

Upravili jsme lidské lymfocyty periferní krve (PBL) tak, aby exprimovaly anti-MART-1 T-buněčný receptor (TCR), který rozpoznává HLA-A*0201 omezený epitop odvozený z klonu DMF5 lymfocytů infiltrujících nádor (TIL).

Zkonstruovali jsme jediný retrovirový vektor, který kóduje jak alfa, tak beta řetězce a dokáže zprostředkovat genetický přenos tohoto T buněčného receptoru (TCR) s vysokou účinností bez nutnosti provádět jakoukoliv selekci.

Ve společných kulturách s HLA-A*0201 pozitivním melanomem vylučovaly T buňky transdukované anti-MART-1 F5 TCR významné množství IFN-, ale žádná významná sekrece nebyla pozorována v kontrolních společných kulturách s buněčnými liniemi.

Anti-MART-1 F5 TCR transdukovaný PBL mohl účinně zabíjet HLA-A*0201 pozitivní nádory. Došlo k malému nebo žádnému rozpoznání normálních fibroblastových buněk.

Tento TCR je více než 10krát reaktivnější s melanomovými buňkami než MART-1 F4 TCR, který zprostředkoval regresi nádoru u dvou pacientů s metastatickým melanomem.

Bylo prokázáno, že poxviry kódující melanomové antigeny, podobné vakcíně ALVAC MART-1, úspěšně imunizují pacienty proti těmto antigenům.

Cíle:

Primární cíle:

Vyhodnotit schopnost čtyř různých strategií zvýšit perzistenci protinádorových T buněk v oběhu po 5-10 dnech a po 31-35 dnech po léčbě (definované jako F5 buňky v kohortách 1 a 2 a aldesleukin v kohortách 3 a 4) a případně vybrat jednu strategii pro další studium.

S dodatkem E je primárním cílem vyhodnotit schopnost tří různých strategií zvýšit perzistenci protinádorových T buněk v oběhu 5-10 dnů a 31-35 dnů po léčbě (definované jako F5 buňky v kohortě 5 aldesleukin v kohortě 6 a vakcína ALVAC MART-1 v kohortě 7) a potenciálně vybrat jednu strategii pro další studii.

Způsobilost:

Pacienti, kteří jsou pozitivní na HLA-A*0201 a jsou starší 18 let, musí mít:

• primární melanomy s lézemi, které jsou ulcerované a větší nebo rovné 2,0 mm, nebo jakékoli léze, které jsou větší nebo rovné 4,0 mm na tloušťku nebo větší nebo rovné 1 pozitivní lymfatické uzlině, nebo lokální recidivy nebo resekované metastatické onemocnění , do 6 měsíců od chirurgické resekce.
• musí být klinicky bez onemocnění v době vstupu do protokolu, jak je dokumentováno radiologickými studiemi do 4 týdnů od vstupu pacienta.
• mohl mít předchozí adjuvantní léčbu imunoterapií, včetně interferonu, pokud od předchozí systémové léčby uplynuly 3 týdny.
• normální hodnoty pro základní laboratorní hodnoty.

Pacienti nemusí mít:

• oční nebo slizniční melanom;
• byli dříve imunizováni MART-1;
• souběžná hlavní zdravotní onemocnění;
• jakákoli forma primární nebo sekundární imunodeficience;
• těžká přecitlivělost na kteroukoli z látek použitých v této studii;

Design:

Mononukleární buňky periferní krve (PBMC) získané leukaferézou (přibližně 1 krát 10^10 buněk) budou kultivovány v přítomnosti anti-CD3 (OKT3) a aldesleukinu za účelem stimulace růstu T-buněk.

Transdukce je zahájena expozicí přibližně 10^8 až 5krát 10^9 buněk supernatantu retrovirového vektoru obsahujícímu geny anti-MART-1 F5 TCR. Tyto transdukované buňky (nazývané buňky F5) budou expandovány a testovány na jejich protinádorovou aktivitu.

Buňky F5 budou podávány intravenózně v dávce 1krát 10^9 až 7krát 10^10 buněk.

Pacienti budou randomizováni do jedné z následujících čtyř kohort:

1. F5 buňky v den 0 samotné
2. F5 buňky v den 0 s následnou subkutánní injekcí 1,0 mg MART-1:26-35(27L) peptidu v Montanide ISA-51 VG v den 0 a den 30.
3. F5 buňky v den 0 s následnou subkutánní injekcí 125 000 IU/kg/den aldesleukinu ve dnech 0-4.

4. F5 buňky v den 0 plus peptid MART-1:26-35(27L) v Montanide ISA-51 VG v den 0 a den 30 a 125 000 IU/kg aldesleukinu ve dnech 0-4.

   Počínaje dodatkem E budou čtyři výše uvedené kohorty uzavřeny pro načítání a pacienti budou randomizováni do následujících kohort:

5. F5 buňky v den 0 po subkutánní injekci vakcíny ALVAC MART-1. Druhá dávka vakcíny ALVAC MART-1 se podává 14. den.
6. F5 buňky v den 0 po subkutánní injekci vakcíny ALVAC MART-1 a poté subkutánní injekci 125 000 IU/kg/den aldesleukinu ve dnech 0-4. Druhá dávka vakcíny ALVAC MART-1 se podává 14. den.
7. Vakcína ALVAC MART-1 ve dnech 0 a 14.

Pacienti podstoupí kompletní vyšetření s fyzikálním vyšetřením, počítačovou tomografií (CT) hrudníku, břicha a pánve (pouze 3 měsíce a poté) a klinickým laboratorním hodnocením v den 35 a 3 měsíce po léčbě a poté každých šest měsíců nebo až do ukončení studie jsou splněna kritéria.

Každá z kohort bude provedena pomocí dvoufázového návrhu MiniMax. Tento návrh se pokusí určit, zda každá z modalit podávání může vyvolat perzistenci přenesených buněk s frekvencí vyšší nebo rovnou 5 procentům cirkulujícího clusteru diferenciace 8 (CD8) plus buněk u 35 procent pacientů na rozdíl od nežádoucí nízké (15 procent), s 3 procentní pravděpodobností přijetí špatného rozvrhu a 15 procentní pravděpodobností odmítnutí dobrého rozvrhu.

Zpočátku bude do každé kohorty zařazeno 22 pacientů. Pokud jsou v dané kohortě zaznamenány čtyři imunologické odpovědi (perzistence), pak by došlo k nárůstu u 39 pacientů. Kohorta s nejvyšším počtem pacientů vykazujících persistenci bude považována za imunologicky aktivní a bude považována za hodnou dalšího rozvoje. Pokud má toto rameno méně než 11 z 39 pacientů s perzistencí, nebude to považováno za hodné dalšího zvažování.

Počínaje dodatkem E bude do každé nové kohorty (skupiny 5–7) zařazeno 10 pacientů. Pokud jsou v některém ze tří ramen 2 nebo více z 10 pacientů s 5 % CD8+ cirkulujících buněk, pak bude tato kohorta považována za hodnou další úvahy.