Anti-MART-1 F5-lymfocyten voor de behandeling van hoogrisico-melanoompatiënten

Achtergrond:

We hebben menselijke perifere bloedlymfocyten (PBL's) ontwikkeld om een ​​anti-MART-1 T-celreceptor (TCR) tot expressie te brengen die een HLA-A*0201-beperkt epitoop herkent dat is afgeleid van de tumor-infiltrerende lymfocyten (TIL)-kloon DMF5.

We construeerden een enkele retrovirale vector die codeert voor zowel alfa- als bètaketens en die de genetische overdracht van deze T-celreceptor (TCR) met hoge efficiëntie kan mediëren zonder enige selectie uit te voeren.

In co-kweken met HLA-A*0201-positief melanoom scheidden anti-MART-1 F5 TCR-getransduceerde T-cellen een significante hoeveelheid IFN- af, maar er werd geen significante secretie waargenomen in controle-co-kweken met cellijnen.

De anti-MART-1 F5 TCR-getransduceerde PBL zou HLA-A*0201-positieve tumoren efficiënt kunnen doden. Er was weinig of geen herkenning van normale fibroblastcellen.

Deze TCR is meer dan 10 keer reactiever met melanoomcellen dan de MART-1 F4 TCR die tumorregressie medieerde bij twee patiënten met gemetastaseerd melanoom.

Van pokkenvirussen die coderen voor melanoomantigenen, vergelijkbaar met het ALVAC MART-1-vaccin, is aangetoond dat ze patiënten met succes immuniseren tegen deze antigenen.

Doelstellingen:

Primaire doelen:

Evalueren van het vermogen van vier verschillende strategieën om de persistentie van antitumor-T-cellen in de bloedsomloop te verbeteren na 5-10 dagen en 31-35 dagen na de behandeling (gedefinieerd als F5-cellen in cohorten 1 en 2, en aldesleukine in cohorten 3 en 4) en selecteer mogelijk één strategie voor verder onderzoek.

Met amendement E is het primaire doel het evalueren van het vermogen van drie verschillende strategieën om de persistentie van antitumor-T-cellen in de bloedsomloop te verbeteren na 5-10 dagen en 31-35 dagen na behandeling (gedefinieerd als F5-cellen in cohort 5 , aldesleukin in cohort 6 en ALVAC MART-1-vaccin in cohort 7) en selecteer mogelijk één strategie voor verder onderzoek.

Geschiktheid:

Patiënten die HLA-A*0201-positief zijn en 18 jaar of ouder zijn, moeten:

• primaire melanomen met laesies die verzweerd zijn en groter zijn dan of gelijk aan 2,0 mm, of laesies die groter zijn dan of gelijk aan 4,0 mm dik, of groter dan of gelijk aan 1 positieve lymfeklier, of lokaal recidief, of gereseceerde metastatische ziekte , binnen 6 maanden na chirurgische resectie.
• moet klinisch ziektevrij zijn op het moment dat het protocol wordt ingevoerd, zoals gedocumenteerd door radiologische onderzoeken binnen 4 weken na binnenkomst van de patiënt.
• mag eerder een adjuvante behandeling met immunotherapie hebben gehad, waaronder interferon, zolang er 3 weken zijn verstreken sinds de eerdere systemische therapie.
• normale waarden voor fundamentele laboratoriumwaarden.

Patiënten hebben mogelijk niet:

• oculair of mucosaal melanoom;
• eerder geïmmuniseerd met MART-1;
• gelijktijdige ernstige medische ziekten;
• elke vorm van primaire of secundaire immunodeficiëntie;
• ernstige overgevoeligheid voor een van de middelen die in dit onderzoek zijn gebruikt;

Ontwerp:

Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) verkregen door leukaferese (ongeveer 1 maal 10^10 cellen) zullen worden gekweekt in aanwezigheid van anti-CD3 (OKT3) en aldesleukine om T-celgroei te stimuleren.

Transductie wordt geïnitieerd door blootstelling van ongeveer 10 ^ 8 tot 5 keer 10 ^ 9 cellen aan retrovirale vectorsupernatant die de anti-MART-1 F5 TCR-genen bevat. Deze getransduceerde cellen (genaamd F5-cellen) zullen worden uitgebreid en getest op hun antitumoractiviteit.

F5-cellen worden intraveneus toegediend in een dosis van 1 maal 10^9 tot 7 maal 10^10 cellen.

Patiënten worden gerandomiseerd in een van de volgende vier cohorten:

1. F5-cellen alleen op dag 0
2. F5-cellen op dag 0 gevolgd door de subcutane injectie van 1,0 mg MART-1:26-35(27L)-peptide in Montanide ISA-51 VG op dag 0 en dag 30.
3. F5-cellen op dag 0 gevolgd door de subcutane injectie van 125.000 IE/kg/dag aldesleukin op dagen 0-4.

4. F5-cellen op dag 0 plus MART-1:26-35(27L)-peptide in Montanide ISA-51 VG op dag 0 en dag 30, en 125.000 IE/kg aldesleukin op dagen 0-4.

   Vanaf amendement E worden de vier bovenstaande cohorten gesloten voor opbouw en worden patiënten gerandomiseerd naar de volgende cohorten:

5. F5-cellen op dag 0 na subcutane injectie van het ALVAC MART-1-vaccin. De tweede dosis ALVAC MART-1-vaccin wordt gegeven op dag 14.
6. F5-cellen op dag 0 na subcutane injectie van ALVAC MART-1-vaccin en vervolgens subcutane injectie van 125.000 IE/kg/dag aldesleukin op dagen 0-4. De tweede dosis ALVAC MART-1-vaccin wordt gegeven op dag 14.
7. ALVAC MART-1 vaccin op dag 0 en 14.

Patiënten zullen een volledige evaluatie ondergaan met lichamelijk onderzoek, computertomografie (CT) van de borst, buik en bekken (3 maanden en daarna) en klinische laboratoriumevaluatie op dag 35 en 3 maanden na de behandeling en vervolgens elke zes maanden of tot het einde van de studie aan de criteria wordt voldaan.

Elk van de cohorten zal worden uitgevoerd met behulp van een tweetraps MiniMax-ontwerp. Dit ontwerp zal proberen te bepalen of elk van de modaliteiten van toediening persistentie van de overgedragen cellen kan produceren met een frequentie van meer dan of gelijk aan 5 procent van circulerende cluster van differentiatie 8 (CD8) plus cellen bij 35 procent van de patiënten, in tegenstelling tot onwenselijk laag (15 procent), met een kans van 3 procent om een ​​slecht rooster te accepteren en 15 procent om een ​​goed rooster af te wijzen.

In eerste instantie zullen in elk cohort 22 patiënten worden ingeschreven. Als vier immunologische reacties (persistentie) worden opgemerkt in een bepaald cohort, dan zou er sprake zijn van opbouw naar 39 patiënten. Het cohort met het hoogste aantal patiënten dat persistentie vertoont, zal als immunologisch actief worden beschouwd en zal verdere ontwikkeling waard worden geacht. Als deze arm minder dan 11 van de 39 patiënten met persistentie heeft, wordt het niet de moeite waard geacht om verder te overwegen.

Vanaf wijziging E worden 10 patiënten ingeschreven in elk nieuw cohort (cohorten 5-7). Als er in een van de drie armen 2 of meer van de 10 patiënten zijn met 5% CD8+ circulerende cellen, dan wordt dit cohort de moeite waard geacht om verder te worden overwogen.