Anti-MART-1 F5 -lymfosyytit suuren riskin melanoomapotilaiden hoitoon

Tausta:

Olemme kehittäneet ihmisen perifeerisen veren lymfosyyttejä (PBL:t) ekspressoimaan anti-MART-1 T-solureseptoria (TCR), joka tunnistaa HLA-A*0201-rajoitetun epitoopin, joka on peräisin kasvaimeen infiltroivien lymfosyyttien (TIL) kloonista DMF5.

Rakensimme yhden retrovirusvektorin, joka koodaa sekä alfa- että beetaketjuja ja voi välittää tämän T-solureseptorin (TCR) geneettistä siirtoa suurella tehokkuudella ilman, että tarvitsee suorittaa mitään valintaa.

Yhteisviljelmissä, joissa oli HLA-A*0201-positiivinen melanooma, anti-MART-1 F5 TCR-transdusoidut T-solut erittivät merkittävän määrän IFN-proteiinia, mutta merkittävää eritystä ei havaittu kontrolliyhteisviljelmissä solulinjojen kanssa.

Anti-MART-1 F5 TCR-transdusoitu PBL voisi tappaa tehokkaasti HLA-A*0201-positiivisia kasvaimia. Normaalit fibroblastisolut tunnistettiin vain vähän tai ei ollenkaan.

Tämä TCR on yli 10 kertaa reaktiivisempi melanoomasolujen kanssa kuin MART-1 F4 TCR, joka välitti kasvaimen regressiota kahdella potilaalla, joilla oli metastaattinen melanooma.

ALVAC MART-1 -rokotteen kaltaisten melanoomaantigeenejä koodaavien rokkovirusten on osoitettu onnistuneesti immunisoivan potilaita näitä antigeenejä vastaan.

Tavoitteet:

Ensisijaiset tavoitteet:

Arvioida neljän eri strategian kykyä parantaa kasvainten vastaisten T-solujen pysyvyyttä verenkierrossa 5-10 päivän ja 31-35 päivän kuluttua hoidon jälkeen (määritelty F5-soluiksi kohorteissa 1 ja 2 ja aldesleukiiniksi kohorteissa 3 ja 4) ja mahdollisesti valitse yksi strategia jatkotutkimuksia varten.

Tarkistuksen E ensisijaisena tavoitteena on arvioida kolmen eri strategian kykyä parantaa kasvaimen vastaisten T-solujen pysyvyyttä verenkierrossa 5-10 päivää ja 31-35 päivää hoidon jälkeen (määritelty F5-soluiksi kohortissa 5 , aldesleukiini kohortissa 6 ja ALVAC MART-1 -rokote kohortissa 7) ja mahdollisesti valitse yksi strategia jatkotutkimuksia varten.

Kelpoisuus:

Potilailla, jotka ovat HLA-A*0201-positiivisia ja jotka ovat vähintään 18-vuotiaita, tulee olla:

• primaariset melanoomat, joissa on haavaumia ja suurempia tai yhtä suuria kuin 2,0 mm, tai leesiot, joiden paksuus on vähintään 4,0 mm tai suurempi tai yhtä suuri kuin 1 positiivinen imusolmuke, tai paikallinen uusiutuminen tai resektoitu metastaattinen sairaus 6 kuukauden sisällä leikkauksesta.
• on oltava kliinisesti taudista vapaa protokollaan kirjautumishetkellä, mikä on dokumentoitu radiologisilla tutkimuksilla 4 viikon kuluessa potilaan saapumisesta.
• on saattanut olla aiemmin saanut adjuvanttihoitoa immunoterapialla, mukaan lukien interferonilla, kunhan aikaisemmasta systeemisestä hoidosta on kulunut 3 viikkoa.
• laboratorioarvojen normaaliarvot.

Potilailla ei välttämättä ole:

• silmän tai limakalvon melanooma;
• on aiemmin immunisoitu MART-1:llä;
• samanaikaisesti esiintyvät vakavat lääketieteelliset sairaudet;
• minkä tahansa muodon primaarinen tai sekundaarinen immuunipuutos;
• vakava yliherkkyys jollekin tässä tutkimuksessa käytetylle aineelle;

Design:

Leukafereesillä saatuja perifeerisen veren mononukleaarisoluja (PBMC) (noin 1 kertaa 10^10 solua) viljellään anti-CD3:n (OKT3) ja aldesleukiinin läsnä ollessa T-solujen kasvun stimuloimiseksi.

Transduktio aloitetaan altistamalla noin 10^8 - 5 kertaa 10^9 solua retrovirusvektorin supernatantille, joka sisältää anti-MART-1 F5 TCR -geenejä. Näitä transdusoituja soluja (kutsutaan F5-soluiksi) kasvatetaan ja niiden kasvainten vastainen aktiivisuus testataan.

F5-soluja annetaan suonensisäisesti annoksena 1 kertaa 10^9 - 7 kertaa 10^10 solua.

Potilaat satunnaistetaan johonkin seuraavista neljästä kohortista:

1. F5-solut pelkästään päivänä 0
2. F5-solut päivänä 0, jota seurasi 1,0 mg:n MART-1:26-35(27L)-peptidin ihonalainen injektio Montanide ISA-51 VG:ssä päivänä 0 ja päivänä 30.
3. F5-solut päivänä 0, jota seurasi ihonalainen injektio 125 000 IU/kg/päivä aldesleukiinia päivinä 0-4.

4. F5-solut päivänä 0 plus MART-1:26-35(27L)-peptidi Montanide ISA-51 VG:ssä päivänä 0 ja päivänä 30 ja 125 000 IU/kg aldesleukiinia päivinä 0-4.

   Muutoksesta E alkaen edellä mainitut neljä kohorttia suljetaan kertymiseltä ja potilaat satunnaistetaan seuraaviin kohortteihin:

5. F5-solut päivänä 0 ALVAC MART-1 -rokotteen ihonalaisen injektion jälkeen. Toinen ALVAC MART-1 -rokoteannos annetaan päivänä 14.
6. F5-solut päivänä 0 ALVAC MART-1 -rokotteen ihonalaisen injektion jälkeen ja sitten ihonalaisen injektion jälkeen 125 000 IU/kg/päivä aldesleukiinia päivinä 0-4. Toinen ALVAC MART-1 -rokoteannos annetaan päivänä 14.
7. ALVAC MART-1 -rokote päivinä 0 ja 14.

Potilaille tehdään täydellinen arviointi, johon kuuluu fyysinen tutkimus, rintakehän, vatsan ja lantion tietokonetomografia (CT) (vain 3 kuukautta ja sen jälkeen) ja kliininen laboratorioarvio 35. päivänä ja 3 kuukautta hoidon jälkeen ja sen jälkeen kuuden kuukauden välein tai tutkimuksen päättymiseen asti kriteerit täyttyvät.

Jokainen kohortti toteutetaan käyttämällä kaksivaiheista MiniMax-suunnittelua. Tällä suunnitelmalla yritetään määrittää, voiko kukin antotapa tuottaa siirrettyjen solujen pysyvyyttä taajuudella, joka on suurempi tai yhtä suuri kuin 5 prosenttia kiertävästä erilaistumisklusterista 8 (CD8) plus soluista 35 prosentilla potilaista, toisin kuin ei-toivotun alhainen (15 prosenttia), 3 prosentin todennäköisyydellä hyväksyä huono aikataulu ja 15 prosentin todennäköisyys hylätä hyvä aikataulu.

Aluksi kuhunkin kohorttiin otetaan 22 potilasta. Jos tietyssä kohortissa havaitaan neljä immunologista vastetta (pysyvyys), 39 potilaalle kertyy. Kohorttia, jossa on eniten pysyviä potilaita, pidetään immunologisesti aktiivisena ja sitä pidetään jatkokehityksen arvoisena. Jos tässä haarassa on alle 11 potilasta 39:stä, joilla on sitkeyttä, sitä ei pidetä lisäharkinnan arvoisena.

Muutoksesta E alkaen jokaiseen uuteen kohorttiin (kohortit 5–7) otetaan 10 potilasta. Jos jossakin kolmesta haarasta on vähintään 2 potilasta 10 potilaasta, joilla on 5 % verenkierrossa CD8+-soluja, tämän kohortin katsotaan olevan lisäharkinnan arvoinen.