Linfociti anti-MART-1 F5 per il trattamento di pazienti con melanoma ad alto rischio

Sfondo:

Abbiamo ingegnerizzato i linfociti del sangue periferico umano (PBL) per esprimere un recettore delle cellule T anti-MART-1 (TCR) che riconosce un epitopo ristretto HLA-A*0201 derivato dal clone dei linfociti infiltranti il ​​tumore (TIL) DMF5.

Abbiamo costruito un singolo vettore retrovirale che codifica sia le catene alfa che beta e può mediare il trasferimento genetico di questo recettore delle cellule T (TCR) con alta efficienza senza la necessità di eseguire alcuna selezione.

Nelle co-colture con melanoma HLA-A*0201 positivo, le cellule T trasdotte anti-MART-1 F5 TCR hanno secreto una quantità significativa di IFN- ma non è stata osservata alcuna secrezione significativa nelle co-colture di controllo con linee cellulari.

Il PBL trasdotto anti-MART-1 F5 TCR potrebbe uccidere efficacemente i tumori HLA-A * 0201 positivi. C'era poco o nessun riconoscimento delle normali cellule dei fibroblasti.

Questo TCR è oltre 10 volte più reattivo con le cellule di melanoma rispetto al MART-1 F4 TCR che ha mediato la regressione del tumore in due pazienti con melanoma metastatico.

È stato dimostrato che i poxvirus che codificano per gli antigeni del melanoma, simili al vaccino ALVAC MART-1, immunizzano con successo i pazienti contro questi antigeni.

Obiettivi:

Obiettivi primari:

Valutare la capacità di quattro diverse strategie di aumentare la persistenza delle cellule T antitumorali nella circolazione a 5-10 giorni e a 31-35 giorni dopo il trattamento (definite come cellule F5 nelle coorti 1 e 2 e aldesleuchina nelle coorti 3 e 4) e potenzialmente selezionare una strategia per ulteriori studi.

Con l'emendamento E, l'obiettivo primario è valutare la capacità di tre diverse strategie di migliorare la persistenza delle cellule T antitumorali nella circolazione a 5-10 giorni e a 31-35 giorni dopo il trattamento (definite come cellule F5 nella coorte 5 , aldesleuchina nella coorte 6 e vaccino ALVAC MART-1 nella coorte 7) e selezionare potenzialmente una strategia per ulteriori studi.

Eleggibilità:

I pazienti che sono HLA-A*0201 positivi e di età pari o superiore a 18 anni devono avere:

• melanomi primari con lesioni ulcerate e maggiori o uguali a 2,0 mm, o qualsiasi lesione maggiore o uguale a 4,0 mm di spessore, o maggiore o uguale a 1 linfonodo positivo, o recidiva locale, o malattia metastatica resecata , entro 6 mesi dalla resezione chirurgica.
• deve essere clinicamente libero da malattia al momento dell'ingresso nel protocollo, come documentato da studi radiologici entro 4 settimane dall'ingresso del paziente.
• può aver avuto un precedente trattamento adiuvante con immunoterapia, compreso l'interferone, purché siano trascorse 3 settimane dalla precedente terapia sistemica.
• valori normali per i valori di laboratorio di base.

I pazienti potrebbero non avere:

• melanoma oculare o della mucosa;
• stato precedentemente immunizzato con MART-1;
• malattie mediche importanti concomitanti;
• qualsiasi forma di immunodeficienza primaria o secondaria;
• grave ipersensibilità a uno qualsiasi degli agenti utilizzati in questo studio;

Progetto:

Cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) ottenute per leucaferesi (circa 1 volta 10^10 cellule) saranno coltivate in presenza di anti-CD3 (OKT3) e aldesleuchina per stimolare la crescita delle cellule T.

La trasduzione viene avviata dall'esposizione di circa 10^8 a 5 volte 10^9 cellule al supernatante del vettore retrovirale contenente i geni F5 TCR anti-MART-1. Queste cellule trasdotte (chiamate cellule F5) saranno espanse e testate per la loro attività antitumorale.

Le cellule F5 saranno somministrate per via endovenosa ad una dose da 1 volte 10^9 a 7 volte 10^10 cellule.

I pazienti saranno randomizzati in una delle seguenti quattro coorti:

1. Celle F5 solo il giorno 0
2. Cellule F5 il giorno 0 seguite dall'iniezione sottocutanea di 1,0 mg di peptide MART-1:26-35(27L) in Montanide ISA-51 VG il giorno 0 e il giorno 30.
3. Cellule F5 il giorno 0 seguite dall'iniezione sottocutanea di 125.000 UI/kg/giorno di aldesleuchina nei giorni 0-4.

4. Cellule F5 il giorno 0 più peptide MART-1:26-35(27L) in Montanide ISA-51 VG il giorno 0 e il giorno 30 e 125.000 UI/kg di aldesleuchina nei giorni 0-4.

   A partire dall'emendamento E, le quattro coorti di cui sopra saranno chiuse per competenza e i pazienti saranno randomizzati nelle seguenti coorti:

5. Cellule F5 il giorno 0 dopo l'iniezione sottocutanea del vaccino ALVAC MART-1. La seconda dose del vaccino ALVAC MART-1 viene somministrata il giorno 14.
6. Cellule F5 il giorno 0 dopo l'iniezione sottocutanea del vaccino ALVAC MART-1 e poi l'iniezione sottocutanea di 125.000 UI/kg/giorno di aldesleuchina nei giorni 0-4. La seconda dose del vaccino ALVAC MART-1 viene somministrata il giorno 14.
7. Vaccino ALVAC MART-1 nei giorni 0 e 14.

I pazienti saranno sottoposti a valutazione completa con esame fisico, tomografia computerizzata (TC) del torace, addome e pelvi (solo 3 mesi e successivamente) e valutazione clinica di laboratorio al giorno 35 e 3 mesi dopo il trattamento e poi ogni sei mesi o fino al termine dello studio i criteri sono soddisfatti.

Ciascuna delle coorti sarà condotta utilizzando un design MiniMax a due stadi. Questo disegno cercherà di determinare se ciascuna delle modalità di somministrazione può produrre la persistenza delle cellule trasferite a una frequenza maggiore o uguale al 5% del cluster circolante di differenziazione 8 (CD8) più cellule nel 35% dei pazienti rispetto a indesiderabilmente basso (15 percento), con una probabilità del 3 percento di accettare un programma scadente e una probabilità del 15 percento di rifiutare un buon programma.

Inizialmente 22 pazienti saranno arruolati in ciascuna coorte. Se si notano quattro risposte immunologiche (persistenza) in una data coorte, si verificherebbe l'arruolamento a 39 pazienti. La coorte con il maggior numero di pazienti che presentano persistenza sarà considerata immunologicamente attiva e meritevole di ulteriore sviluppo. Se questo braccio ha meno di 11 dei 39 pazienti con persistenza, non sarà considerato degno di ulteriore considerazione.

A partire dall'emendamento E, 10 pazienti saranno arruolati in ogni nuova coorte (coorti 5-7). Se su uno qualsiasi dei tre bracci ci sono 2 o più pazienti su 10 con il 5% di cellule circolanti CD8+, allora questa coorte sarà considerata degna di ulteriore considerazione.