Využití mateřského kyslíku během porodu a superoxiddismutáza pupečníkové krve

Provedli jsme prospektivní randomizovanou kontrolovanou klinickou studii na kohortě rodících žen, které byly přijaty do Porodního centra ve Fakultní nemocnici George Washingtona. Tato studie byla schválena Institutional Review Board Univerzity George Washingtona a souhlasy byly získány od všech subjektů před zápisem. Všechny zařazené pacientky splňovaly následující kritéria: a) nekomplikované těhotenství, b) předčasný gestační věk od ukončeného 37. týdne do 42. týdne a c) normální spontánní vaginální porod (NSVD) nebo elektivní císařský řez. Těhotné ženy byly z této studie vyloučeny, pokud měly některý z následujících stavů: a) hypertenze nebo eklampsie, b) cukrovka vyvolaná těhotenstvím, c) anémie, d) jiné lékařské nebo chirurgické komplikace během současného těhotenství, e) ruptura plodových obalů déle než 18 hodin, f) anamnéza kojenců s invazivním streptokokovým onemocněním skupiny B v předchozích těhotenstvích, g) fetální tíseň před porodem a h) podezření na chromozomální a strukturální anomálie nebo vrozené infekce. Shromáždili jsme údaje o mateřské anamnéze (věk, rasa, parita a typ anestezie) a porodní historii (antropometrická měření, gestační věk, pohlaví a Apgar skóre).

Randomizace: Po zařazení do studie byli všichni jedinci náhodně rozděleni do jedné ze dvou skupin pomocí techniky zatavených neprůhledných obálek. Ke všem subjektům byla připojena nosní kanyla, která byla napojena na průtokoměr zakrytý kovovou fólií, aby řídící porodníci nevěděli, do které skupiny daný subjekt patří. Účastníci Oxygen Group dostávali 100% kyslík rychlostí 2 litry/minutu počínaje nejméně 30 minut před porodem. Účastníci kontrolní skupiny měli nosní kanylu stále připojenou k průtokoměru, který byl vypnutý. Po porodu byla účastníkům odpojena nosní kanyla.

Postup monitorování: Těhotné ženy byly nepřetržitě sledovány na srdeční frekvenci, dechovou frekvenci a saturaci kyslíkem. Pokud saturace kyslíkem klesla < 93 % po dobu alespoň 60 sekund a/nebo kdykoli to porodník považoval za nutné, byl podán terapeutický kyslík a účastnice byla ze studie vyloučena.

Laboratorní vyšetření: Získali jsme tři vzorky po 3 ml plné krve od každého páru matka-dítě v obou skupinách. První vzorek krve byl získán z periferní žíly účastníků v době zařazení před randomizací (základní stav). Druhý vzorek krve byl odebrán z placentární strany pupeční šňůry po porodu. Třetí vzorek byl získán z periferní žíly účastníků do 4 hodin po porodu.

Měřili jsme krevní plyny v každém vzorku u lůžka pomocí analyzátoru iSTAT (Abbott, IL). Zbytek vzorku byl použit pro testy SOD. Byl shromážděn v ledové zkumavce obsahující EDTA a centrifugován při 4 °C. Plazma byla odstraněna a suspenze erytrocytů byla promyta normálním fyziologickým roztokem a znovu dvakrát odstředěna. Promyté suspenze erytrocytů byly skladovány při -70 °C až do doby testu.

Koncentrace SOD byla měřena nepřímou kolorimetrickou metodou za použití ve vodě vysoce rozpustné tetrazoliové soli WST-1, která po redukci superoxidovým aniontem produkuje ve vodě rozpustné formazanové barvivo. Pro měření aktivity SOD v lyzátu erytrocytů byla použita testovací souprava Cayman Chemical SOD. Aktivita SOD byla hodnocena měřením dismutace superoxidových radikálů generovaných oxidem xanthinu a hypoxanthinem ve vhodném formátu s 96 jamkami. Tato technika zahrnovala standard SOD s řízenou kvalitou. Standardní křivka, která byla vytvořena pomocí tohoto enzymu, poskytuje prostředek pro přesnou kvantifikaci aktivity všech tří typů SOD (Cu/Zn-, Mn- a Fe-SOD). Koncentrace SOD vyjádřená v IU na gram obsahu hemoglobinu. Byly zaznamenány výsledky koncentrace SOD, pH, pCO2, pO2, deficitu báze, koncentrace Ht a Na.