Vztah mezi subklinickou hypotyreózou a výsledkem těhotenství (GravThyr)

Cílem je odhadnout vztah mezi SH a spontánním potratem a/nebo porodnickými komplikacemi z důvodu mitochondriální dysfunkce.

1. Prospektivní studie, kde budou analyzována data z General Suburban Population Study v Naestved za účelem měření frekvence subklinické hypotyreózy (SH) a TPOab. SH je definována jako zvýšená sérová koncentrace TSH > 3,4 mU/la normální hladiny volného T4 a T3. Pro TPOab se používá cut-off 60 mU/l.
2. Odhadnout vztah mezi SH nebo TPOab a časným spontánním potratem a výsledkem těhotenství. Zahrnutí žen, které prodělaly minimálně jeden časný spontánní potrat ve věku 20 až 50 let: 50 žen, které mají SU a/nebo TPOab-pozitivní a 50 žen, které mají normální hladiny TSH a TPOab-negativní. Pomocí průtokové cytometrie bude měřena bazální spotřeba kyslíku a mitochondriální funkce.
3. Odhadnout prevalenci gestační hypertenze a preeklampsie u těhotných žen se subklinickou hypotyreózou a odhadnout mitochondriální funkci. Zahrnuto bude minimálně 100 těhotných žen bez onemocnění štítné žlázy nebo cukrovky.

Časný spontánní potrat je definován jako potrat před 12. týdnem těhotenství. Porodnické komplikace jsou definovány jako preeklampsie (proteinurie, edém, hypertenze), těhotenstvím indukovaná hypertenze, placentární insuficience (IUGR) a abrupce, předčasný porod a mrtvé narození. Tyto komplikace budou analyzovány z dat porodnických časopisů.

Měření spotřeby kyslíku:

Analýza respiračních plynů a měření objemu byly prováděny pomocí vrchlíku připojeného pomocí trojitého V (snímač průtoku/plynu) k přístroji Oxycon (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Nizozemí). Zařízení bylo před každým testem kalibrováno, aby kompenzovalo okolní podmínky, jako je tlak vzduchu, teplota a vlhkost. Bazální VO2 bylo měřeno po alespoň 6 hodinách hladovění. Před testem byl stanoven individuální klidový puls a účastníci odpočívali asi 30 minut na židli. Zkušebna byla tichá a osvětlení tlumené. Subjekty dostaly dostatek času, aby se seznámily s vybavením a postupy, a test byl zahájen po dosažení klidového pulzu. Spotřeba kyslíku byla měřena, když spotřeba za minutu zůstala konstantní. Měření byla prováděna opakovaně po 30 sekundách po dobu 20 minut. Metoda pro zaznamenávání spotřeby kyslíku měla během dne odchylku 0,8 % a mezidenní odchylku 5,8 %.

Měření mitochondriální hmoty (MM) a mitochondriálního membránového potenciálu (MMP) průtokovou cytometrií:

Venózní krev byla pacientovi odebrána do zkumavek EDTA Vacutainer. Od každého pacienta byly zpracovány 2 vzorky po 100 ul krve. Byla analyzována jedna neobarvená kontrolní zkumavka a jedna obarvená.

Ke vzorkům, které se mají barvit, byl přidán 1 ul Pacific Blue Mouse Anti-Human anti-CD14 (BD Biosciences, Dánsko) a promíchány. Zkumavky byly inkubovány po dobu 30 minut při teplotě místnosti chráněné před přímým světlem a následně promyty.

Obarvené buňky byly resuspendovány v 890 ul PBS a bylo přidáno 10 ul 1 uM MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Dánsko) a 100 ul 1 uM TMRM (methylester tetramethylrhodaminu, Invitrogen A/S, Dánsko). Všechny zásobní roztoky byly rozpuštěny v DMSO (dimethylsulfoxid) a pracovní roztoky byly zředěny v PBS. Po smíchání byly vzorky inkubovány po dobu 30 minut při teplotě místnosti ve tmě.