Forholdet mellom subklinisk hypothyroidisme og utfallet av graviditet (GravThyr)

Målet er å estimere sammenhengen mellom SH og spontanabort og/eller obstetriske komplikasjoner på grunn av mitokondriell dysfunksjon.

1. En prospektiv studie hvor data fra General Suburban Population Study i Nestved vil bli analysert for å måle frekvensen av subklinisk hypotyreose (SH) og TPOab. SH er definert som økte serumkonsentrasjoner av TSH > 3,4 mU/l og normale nivåer av fritt T4 og T3. En cut-off på 60 mU/l brukes for TPOab.
2. For å estimere forholdet mellom SH eller TPOab og tidlig spontanabort og graviditetsutfall. Inkludering av kvinner som har opplevd minimum én tidlig spontanabort og mellom 20 og 50 år: 50 kvinner som har SU og/eller TPOab-positive og 50 kvinner som har normale nivåer av TSH og TPOab-negative. Det basale oksygenforbruket vil bli målt og mitokondriefunksjoner vil bli bestemt ved flowcytometri.
3. Å estimere forekomsten av svangerskapshypertensjon og preeklampsi blant gravide kvinner med subklinisk hypotyreose og estimere mitokondriefunksjonen. Minimum 100 gravide kvinner uten skjoldbruskkjertelsykdom eller diabetes vil bli inkludert.

Tidlig spontanabort er definert som abort før 12 ukers svangerskap. Obstetriske komplikasjoner er definert som preeklampsi (proteinuri, ødem, hypertensjon), svangerskapsindusert hypertensjon, placentainsuffisiens (IUGR) og abrupt, prematur fødsel og dødfødsel. Disse komplikasjonene vil bli analysert fra dataene fra obstetriske journaler.

Måling av oksygenforbruk:

Respirasjonsgassanalyse og volummålinger ble utført med en baldakin koblet med en trippel V (flow⁄gassensor) til et Oxycon-apparat (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Nederland). Utstyret ble kalibrert før hver test for å kompensere for omgivelsesforhold som lufttrykk, temperatur og fuktighet. Basal VO2 ble målt etter minst 6 timers faste. Før testen ble den individuelle hvilepulsen etablert og deltakerne hvilte i ca. 30 minutter i en stol. Testrommet var stille og belysningen var dempet. Forsøkspersonene fikk tilstrekkelig tid til å bli kjent med utstyret og prosedyrene, og testen ble igangsatt når hvilepulsen var oppnådd. Oksygenforbruket ble målt når opptak per minutt holdt seg konstant. Målinger ble utført i gjentatte perioder på 30 sekunder i 20 minutter. Metoden for registrering av oksygenopptak hadde en variasjon innen dag på 0,8 % og en dag-til-dag variasjon på 5,8 %.

Måling av mitokondriell masse (MM) og mitokondriell membranpotensial (MMP) ved flowcytometri:

Venøst ​​blod ble tappet fra pasienten i EDTA Vacutainer-rør. Fra hver pasient ble det behandlet 2 prøver på 100 µl blod. Ett ufarget kontrollrør og ett farget ble analysert.

Prøvene som skulle farges ble tilsatt 1 µl Pacific Blue Mouse Anti-Human anti-CD14 (BD Biosciences, Danmark) og blandet. Rørene ble inkubert i 30 minutter ved romtemperatur beskyttet mot direkte lys og deretter vasket.

De fargede cellene ble resuspendert i 890 µl PBS og tilsatt 10 µl 1 µM MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Danmark) og 100 µl 1 µM TMRM (Tetramethylrhodamine methylester, Invitrogen A/S, Danmark). Alle stamløsninger ble oppløst i DMSO (dimetylsulfoksid) og arbeidsløsninger ble fortynnet i PBS. Etter blanding ble prøver inkubert i 30 minutter ved romtemperatur i mørke.