Relazione tra ipotiroidismo subclinico ed esito della gravidanza (GravThyr)

L'obiettivo è quello di stimare la relazione tra SH e aborto spontaneo e/o complicanze ostetriche dovute a disfunzione mitocondriale.

1. Uno studio prospettico in cui verranno analizzati i dati del General Suburban Population Study di Naestved per misurare la frequenza dell'ipotiroidismo subclinico (SH) e del TPOab. SH è definito come aumento delle concentrazioni sieriche di TSH > 3,4 mU/l e livelli normali di T4 e T3 liberi. Per TPOab viene utilizzato un cut-off di 60 mU/l.
2. Per stimare la relazione tra SH o TPOab e l'aborto spontaneo precoce e l'esito della gravidanza. Inclusione di donne che hanno subito almeno un aborto spontaneo precoce e di età compresa tra 20 e 50 anni: 50 donne con SU e/o TPOab-positive e 50 donne con livelli normali di TSH e TPOab-negative. Il consumo di ossigeno basale sarà misurato e le funzioni mitocondriali saranno determinate mediante citometria a flusso.
3. Stimare la prevalenza dell'ipertensione gestazionale e della preeclampsia tra le donne in gravidanza con ipotiroidismo subclinico e stimare la funzione mitocondriale. Saranno incluse almeno 100 donne incinte senza alcuna malattia della tiroide o diabete.

L'aborto spontaneo precoce è definito come l'aborto prima delle 12 settimane di gestazione. Le complicanze ostetriche sono definite come pre-eclampsia (proteinuria, edema, ipertensione), ipertensione indotta dalla gravidanza, insufficienza placentare (IUGR) e distacco, parto pretermine e natimortalità. Tali complicazioni saranno analizzate dai dati delle riviste ostetriche.

Misurazione del consumo di ossigeno:

L'analisi dei gas respiratori e le misurazioni del volume sono state eseguite con un baldacchino collegato da una tripla V (sensore di flusso/gas) a un apparecchio Oxycon (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Paesi Bassi). L'apparecchiatura è stata calibrata prima di ogni test per compensare le condizioni ambientali come la pressione dell'aria, la temperatura e l'umidità. Il VO2 basale è stato misurato dopo almeno 6 ore di digiuno. Prima del test è stato stabilito il polso a riposo individuale e i partecipanti hanno riposato per circa 30 minuti su una sedia. La sala prove era silenziosa e l'illuminazione era soffusa. Ai soggetti è stato concesso tempo sufficiente per familiarizzare con l'apparecchiatura e le procedure e il test è stato avviato quando è stato raggiunto il polso a riposo. Il consumo di ossigeno è stato misurato quando l'assorbimento al minuto è rimasto costante. Le misurazioni sono state eseguite per periodi ripetuti di 30 secondi per 20 minuti. Il metodo per la registrazione del consumo di ossigeno presentava una variazione giornaliera dello 0,8% e una variazione giornaliera del 5,8%.

Misurazione della massa mitocondriale (MM) e del potenziale di membrana mitocondriale (MMP) mediante citometria a flusso:

Il sangue venoso è stato prelevato dal paziente in provette Vacutainer con EDTA. Da ciascun paziente sono stati processati 2 campioni di 100 µl di sangue. Sono state analizzate una provetta di controllo non colorata e una colorata.

Ai campioni da colorare sono stati aggiunti 1 µl di Pacific Blue Mouse Anti-Human anti-CD14 (BD Biosciences, Danimarca) e miscelati. Le provette sono state incubate per 30 minuti a temperatura ambiente al riparo dalla luce diretta e successivamente lavate.

Le cellule colorate sono state risospese in 890 µl di PBS e aggiunte 10 µl 1 µM MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Danimarca) e 100 µl 1 µM TMRM (Tetrametilrodamina metil estere, Invitrogen A/S, Danimarca). Tutte le soluzioni madre sono state sciolte in DMSO (dimetilsolfossido) e le soluzioni di lavoro sono state diluite in PBS. Dopo la miscelazione i campioni sono stati incubati per 30 minuti a temperatura ambiente al buio.